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【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin, Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因(NM_001314210.1)和牛TNNT3基因(XM_010821200)mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量(real-time PCR,RT-qPCR)及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织(背最长肌(longissimus dorsi muscle,LD)、半膜肌(semimembranosus muscle,SM)、心、肝、脾、肺、肾)和7个发育阶段(胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300)肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MuSCs)中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3(NM_001314210.1)CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因 5个新转录本(TNNT3_1—5),其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其中在骨骼肌中高度富集(P < 0.01),心脏及肺次之,其余组织中较低;TNNT3 mRNA在背最长肌和半膜肌中的表达始终处于一个动态变化中,胚胎期TNNT3在半膜肌的表达量高于背最长肌(P<0.05);出生后则背最长肌中高于半膜肌(P<0.05)。④山羊TNNT3基因转录本TNNT3_3重复出现保守的外显子9—11(138bp),体外翻译实验显示其可编码蛋白且蛋白大小与预期基本相符(37 kD);相较于对照组,在山羊MuSCs中过表达该转录本使肌分化标志基因Myomaker、MyoG和MyH4 mRNA极显著升高(P < 0.01)。【结论】获得了山羊TNNT3基因具有完整CDS区5个新可变剪切体,TNNT3主要在肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中高表达,在哺乳动物中高度保守且促进成肌分化。初步表明TNNT3基因在动物肌肉生长发育中具有重要的生物学功能。 相似文献
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梨树经过一个夏季的挂果,其体内营养逐渐消耗,且采果后又要进入花芽分化时期‘。这一时期正是为次年丰收打好基础的关键生理时期。然而,我们不少果农对此重要生理时期认识不足,忽视了对采果后的生产管理,导致梨园中的叶片衰黄、病虫猖獗、土壤干旱等不良现象发生。再加上“小阳春”的到来,相当比例的植株便会在10月底至11月初开放花朵,此即为梨树的“二次花”现象。“二次花”的出现,就意味着树体的极其衰弱,次年的少花少果与减产必将产生。因此,如何对梨树采后进行科学管理,保证次年丰收f稳产)优质,是梨树管理的重要环节和重点技术。 相似文献
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9月份以来.CBOT大豆在美豆产量前景改善、南美新豆产量将创下历史最高纪录等预期背景下见顶回落。由最高纪录1789美分/蒲式耳一路回落在1500美分/蒲式耳之下.回落幅度超16%。在市场供应偏紧、需求仍旧旺盛的背景下, 相似文献
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以2005年嫁接换冠的早熟板栗品种早枣红ll号为试材,进行了修剪对其生长结果的影响试验。生长季修剪包括抹芽、摘梢、除雄,以不处理为对照;冬季修剪于12月中旬进行,对带果的母枝设轻截(截1/4)、中截(截1/3)、重截(截1/2),不截(对照)4个处理。结果表明,抹芽、摘梢、除雄能够促进板栗雌花芽分化,增加雌花芽数量;截枝对板栗平均叶面积、平均叶质量、结果枝数、平均雌花序数、平均雄花枝数和坐蓬率都有明显的影响; 相似文献
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<正>1症状主要危害幼瓜、叶、茎。病菌多从开败的雌花侵入,致花瓣腐烂,并长出淡灰褐色的霉层,进而向幼瓜扩展,致脐部呈水渍状,幼花迅速变软、萎缩、腐烂,表 相似文献
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1.幼菇不分化幼菇不分化的原因有两方面。(1)棚温偏低棚温低不适合幼蕾发育分化。处理方法:通过提高棚温即可解决。(2)药物影响为防发病有的菇农使用大量农药拌料,甚至发菌期间也喷洒农药,结果使菌袋内废气浓重,抑制菌丝发生。处理方法:将料面划 相似文献