结球甘蓝雌蕊调控因子SPT与HEC1的克隆及相互作用分析     

许俊强孙梓健  刘智宇杨朴丽汤青林  王志敏宋 明 王小佳 《作物学报》2014,40(6):1011-1019

为研究SPT和HECs及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响, 以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料, 提取雌蕊总RNA, 根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物, 采用同源克隆的方法克隆SPT基因, 其序列1085 bp, 开放阅读框(ORF) 1062 bp; HEC1基因ORF 696 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明, SPT编码353个氨基酸残基, 预测分子量为37.67 kD, pI为6.83; HEC1编码231个氨基酸残基, 预测分子量为25.26 kD, pI为10.2。分析表明, 两基因在各器官中均表达, 但SPT在果实和雌蕊中表达量最高, 而HEC1在根和花蕾中的表达量最高。为检测两者的相互作用, 构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1, Pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用。同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体, 分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象, 融合后的二倍体酵母均能在SD/–Trp–Leu–Ade–His/X-α-gal/AbA板上长出蓝色菌斑, 表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因, 酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致, 说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育。  相似文献   

果梅PmKNAT2基因全长cDNA克隆及表达分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

孙海龙  宋娟  高志红  倪照君  章镇 《中国农业科学》2014,47(17):3444-3452

【目的】从‘大嵌蒂’果梅中克隆PmKNAT2,并对其结构特征及表达模式进行分析,为研究果梅雌蕊败育的分子机理和分子育种奠定基础。【方法】在NCBI中查找与果梅相似性很高的桃KNOPE2（KNAT2的同源基因）序列（EF093491）,根据桃的KNOPE2序列设计特异引物;采用改良CTAB法提取‘大嵌蒂’果梅花芽总RNA;通过RT-PCR和RACE技术获得基因cDNA序列全长;使用DNAMAN软件进行序列拼接;利用NCBI数据库中的BLASTn和BLASTp程序进行相似性分析;通过生物信息学方法分析结构特征;用DNAMAN软件分析基因的ORF和氨基酸序列;MEGA4.0软件进行系统进化树的构建;利用Bioxm2.6推测分析蛋白分子量和等电点;根据NCBI中Conserved Domains程序进行蛋白质保守域结构预测;用ExPaSy提供的在线SOPMA程序进行蛋白质二级结构预测;构建PJIT166-PmKNAT2-GFP的融合亚细胞定位表达载体,采用基因枪法转化洋葱表皮细胞,经暗培养后在激光共聚焦显微镜下观察;利用实时荧光定量RT-PCR研究其表达模式,分析其在‘大嵌蒂’花芽发育不同时期、不同器官中的表达特性。【结果】在‘大嵌蒂’果梅中获得一个KNAT2的同源基因,命名为PmKNAT2,其cDNA全长为1 402 bp,5'UTR 47 bp,3'UTR 293 bp,编码区全长为1 062 bp,编码353个氨基酸,预测蛋白质分子量为40.41 kD,理论等电点为4.85。蛋白结构分析表明该基因编码的氨基酸具有2个结构域,MEINOX结构域（KNOXⅠ和KNOXⅡ 2个亚结构域）和HD（homomeodomain）结构域,属于KNOX蛋白;相似性分析发现该基因与GenBank中其它来源的KNOX蛋白序列的相似性为50%-100%;系统进化树分析显示果梅PmKNAT2与桃KNOX聚为一类,表明与其亲缘关系最近。二级结构预测结果表明PmKNAT2所编码蛋白由47.14%的α-螺旋（Alpha helix）、3.43%的β-转角（Beta turn）、3.14的β-折叠（Extended strand ）和46.29%的随机卷曲（Random coil）组成。亚细胞定位结果显示该基因编码的蛋白定位于细胞核和细胞膜中。实时荧光定量RT-PCR分析表明,在‘大嵌蒂’果梅不同时期花芽中PmKNAT2的表达量存在一定差异,PmKNAT2在11月份的表达量最高,9月、10月和11月的表达量差异不明显,但与12月和1月花芽中的表达量差异明显;生长素在1月份含量最高,9、10、11月份差异不明显,其含量变化趋势与PmKNAT2表达趋势相反。对该基因表达量最高的11月份的花芽进行实时荧光定量分析发现：PmKNAT2在各种花芽中均有表达,在不完全花（雌蕊褐色、雌蕊畸形和无雌蕊）中的表达量高于完全花（雌蕊正常）。进一步分析PmKNAT2在完全花与不完全花的不同花器官中的表达量,结果表明PmKNAT2在完全花与不完全花的各部位的表达量趋势相似均为：萼片>雄蕊>花瓣,在完全花雌蕊中的表达量最低。【结论】推测PmKNAT2在雌蕊发育阶段的异常表达可能与‘大嵌蒂’果梅雌蕊败育有关。  相似文献   

不同播期对强盛49出苗速度及生育期的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

武艳芍  郝建平 《中国农学通报》2009,25(4):119-121

试验系统的研究了在不同播期,日均温对强盛49的出苗速度及生育期的影响,研究结果表明：播期和强盛49的出苗速度以及生育期之间有真实的线性回归关系：Y=9.8335*EXP(-0.019806*X),R=0.9118*;Y=131.0100*EXP(-0.003249*X）,R=0.9884*;;日均温和强盛49的生育期也存在真实的线性关系：Y= 464.2999-14.2397X,R=0.9849* 。上述方程可以为选择适宜播期提供理论依据。  相似文献   

新铁炮百合雌蕊离体培养及植株再生研究     

李慧 《江苏农业科学》2009,(5)

以新铁炮百合的雌蕊为外植体,对影响小鳞茎的诱导、增殖、生根等因子进行试验.试验结果表明:诱导小鳞茎的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;雌蕊不同部位分化的能力不同,从强到弱依次为子房>花柱>柱头;在一定浓度范围内,蔗糖浓度的高低影响小鳞茎的增殖速度,最适浓度为60 g/L;最佳生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA+3 g/L活性炭.  相似文献   

负载量对翌年杏花器官质量的影响     

刘铁铮  李海山  付雅丽  贾彦丽  张冲  陈江玉  葛元华 《河北农业科学》2011,15(5):23-24,64

合理负载是改善果实品质的重要途径。以生产上的主栽杏品种金太阳杏为试材,以不疏果为对照,研究了不同负载量（果间距5 cm、10 cm、15 cm和20 cm）对翌年花器官质量（花芽、花瓣和雌蕊重量,花瓣大小,雌蕊败育率）的影响。结果表明：疏果可以显著提高单花芽、单花瓣和单雌蕊的重量以及雌蕊的可溶性糖含量,提高花芽的可溶性糖含量,显著降低雌蕊败育率。生产上,金太阳杏疏果间距保持在15～20 cm,对提高翌年杏花器官质量效果较好。  相似文献   

仁用杏雌性器官败育研究   总被引：15，自引：1，他引：14  

王保明  丁改秀  童德中  刘淑芳 《山西农业科学》2000,28(1):57-61

对仁用杏雌性器官败育研究结果表明,杏花芽分化期,雌蕊败育存在着８ 种不同的形态;杏雌蕊败育的两个集中时期为１１ 月中旬至１２ 月中旬,２ 月中旬至３ 月中旬;杏雌蕊败育与品种特性、树体营养状况、外界气候因子等有关;在仁用杏花芽生理分化期和形态分化初期喷施植物生长调节剂和氨基酸营养液,可明显减少杏雌蕊败育。  相似文献   

大棚草莓畸形果成因与预防     

方曙棠  叶金华  程罗生 《农业装备技术》2006,32(3):44-44

大棚草莓栽培过程中,经常出现畸形果,是制约产量和品质提高的一个重要原因,草莓畸形果形成的主要原因是授粉不良,如果开花时只有一部分的雌蕊受精,另一部分雌蕊因种种原因没有能受精,没有能形成种子,就会出现畸形果.  相似文献   

质谱蛋白质组学研究中草莓雌蕊蛋白提取方法优化     

裘劼人  柴伟国  童建新  周历萍  王淑珍 《浙江农业学报》2020,32(12):2186

为筛选适用于质谱蛋白质组学研究的草莓雌蕊蛋白提取方法,通过在传统酚提法中加入氯仿提取步骤建立了一种新的酚氯仿提取方法,并对三氯乙酸/丙酮沉淀法(方法Ⅰ)、酚提法(方法Ⅱ)和酚氯仿法(方法Ⅲ)提取草莓雌蕊蛋白的3种方法的适用性进行了评估。总蛋白提取得率、总蛋白鉴定通量、非共有蛋白亚细胞位置和亲疏水性分布4个方面的分析结果表明,酚氯仿法的蛋白提取效率最高,蛋白提取最全面。方法Ⅰ、方法Ⅱ、方法Ⅲ的蛋白提取得率分别为0.20%、0.12%和0.27%,总蛋白鉴定量分别为5 170、5 345和5 697。韦恩图分析显示,方法Ⅲ交集到了方法Ⅰ和方法Ⅱ的大部分非共有蛋白。亚细胞定位分析显示,方法Ⅰ和方法Ⅲ的非共有蛋白主要分布在细胞核中,而方法Ⅱ则主要分布在细胞质中,表明3种方法具有不同的亚细胞偏好性。亲疏水性分析显示,方法Ⅰ亲水性蛋白比例最高但疏水性蛋白提取不足,方法Ⅱ则亲水性蛋白提取较少,方法Ⅲ兼顾了亲疏水性蛋白的提取。试验结果表明,3种方法中方法Ⅲ为草莓雌蕊的最优提取方法。  相似文献   

Effect of CRMS on male sterility of rice plant     

WANGXi YUMeiyu YAOFude 《中国水稻研究通报》1995,3(2):2-4

The experiments were carried out in paddy field of CNRRI in 1985-1989. Seedlings of the indica variety Erjiufeng were raised in a seedbed and transplanted to pots with area of 0.1 m~2 at seedling age of 30 d. Treatments with (CRMS) were conducted at different stages: pistil and stigma primordium formation  相似文献   

梨树高产巧施肥     

戴忠孝 《农家参谋》2011,(5):16-16

一、巧施花前肥＂花前不施肥,开花树撅嘴。＂梨花开花前施肥,是开春后第一次给梨树施肥。对梨树花芽萌动、雄蕊形成、雌蕊发育和提高受精率效果显著。花前应以速效肥料为主,每株成龄结果树,以有机肥40千克、碳铵0.5千克、磷肥2千克、草木灰4千克与30千克沙土混匀,环施或挖穴施入。二、适时追施花后肥＂施好花前花后肥,满园花来满树梨。＂  相似文献