TES基因C端的分段克隆与表达     

冯波  曾虹燕  钟英丽  张健 《广西农业生物科学》2007,26(3):205-209

为了在大肠杆菌中分段表达人类TES基因C端3个顺次排列的LIM结构域,利用PCR技术从含有TES基因全长编码序列的质粒pCMV-HA-TES中扩增出这3个LIM domain基因片段,分别重组入pGEM-T载体,再经酶切后,将获得的目的片段亚克隆入原核表达载体pQE-N1进行融合表达。酶切鉴定及测序结果表明,扩增产物与已知基因序列一致,成功构建了3个目的片段的pQE-N1表达质粒;SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达出与预期分子质量大小相同的3个融合蛋白。  相似文献   

山羊卵泡细胞中bFGF基因表达和bFGF cDNA部分序列分析     

王保莉  张涌 《农业生物技术学报》2003,11(1):44-48

建立了一种检测山羊(Caprane)卵泡中bFGF基因表达的RT—PCR技术。检测了在不同大小的山羊卵泡中bFGF基因表达情况。结果表明，在不同大小的卵泡细胞、卵丘卵母细胞复合体、颗粒细胞和卵泡膜中都检测到了bFGF的基因表达。同时．对山羊卵泡中的bFGF cDNA部分序列进行了，序列分析，并与牛和人的相应序列进行了比较，表明它们具有高度的序列相似性。  相似文献   

马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(sAGP)的克隆及其在毕赤酵母中的表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

宋波涛  柳俊  谢从华  成善汉 《农业生物技术学报》2005,13(3):282-287

  相似文献   

Comprehensive Analysis of Plant Gene Expression in Soybean Root Nodules at Different Growth Stages     

Sirilak Kaewsuralikhit  Tadashi Yokoyama  Hirochi Kouchi  Yasuhiro Arima 《Soil Science and Plant Nutrition》2005,51(4):535-547

Gene expression profiles in early (12 d after sowing, DAS), mature (35 DAS) and senescent (77 DAS) soybean ( Glycine max (L.) Merr. cv. Enrei) root nodules were analyzed using Lotus japonicus cDNA macroarray. The cDNA macroarray membranes contained 18,144 independent cDNAs of L. japonicus isolated from various organs. The membranes were hybridized to ³³P-labeled single-strand cDNAs transcribed from mRNA extracted from the soybean root nodules at three different growth stages. The results showed that over 75% of the cDNA clones gave a relative signal intensity (RSI) lower than 300, irrespective of the soybean growth stage. cDNA with an RSI value over 5,000 accounted for 2.1, 1.2 and 0.5% of the total cDNA clones at 12, 35 and 77 DAS, respectively. The highest RSI value was detected in a clone hybridized to putative pectinesterase (MWM097c10_r) at 12 DAS, while the RSI value of lycopene β-cyclase (MWL025d06_r) was the highest at 35 and 77 DAS. At 77 DAS, the percentage of transferase gene cDNA clones accounted for 20.5% of the total cDNA clones showing an RSI value over 500, a value clearly lower than that at 12 and 35 DAS. On the other hand, the percentage of hydrolase gene cDNA clones accounted for 45.2% at 77 DAS, a value around 1.5 times higher than that at 12 and 35 DAS. The chronological RSI profiles of individual cDNA clones were classified into nine patterns, and the profiles of the cDNA clones belonging to 15 homologous gene groups encoding enzymes of nitrogen and carbon metabolism, nodule specific proteins, enzymes of RNA and protein hydrolysis, and synthesis of jasmonic acid precursor were compared within and between groups. As a result, significant variations both within- and between-groups were revealed.  相似文献   

兴安落叶松诱导抗性对舞毒蛾幼虫解毒酶活性的影响   总被引：4，自引：0，他引：4  

冯春富  严善春  鲁艺芳  胡晓 《林业科学》2011,47(8)

为了解不同诱导处理与落叶松诱导抗性及广食性昆虫舞毒蛾协同抗性之间的关系,以喷施茉莉酸甲酯、茉莉酮、舞毒蛾幼虫取食和松毛虫幼虫取食4种方法处理落叶松幼苗,检验舞毒蛾幼虫取食不同处理诱导的落叶松后,其中肠酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(AKP)、羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)4种解毒酶活性随时间的变化趋势。结果表明:取食不同处理诱导的落叶松后,舞毒蛾幼虫酸性磷酸酯酶活性均显著低于对照;取食经舞毒蛾幼虫取食诱导的落叶松后,试虫中肠碱性磷酸酯酶活性先升高后降低,除此之外,取食其他3种处理诱导的落叶松后,幼虫中肠碱性磷酸酯酶活性均受到抑制;幼虫羧酸酯酶活性也都受到不同程度抑制,与对照相比差异极显著;幼虫谷胱甘肽S-转移酶的活性,取食茉莉酸甲酯和舞毒蛾幼虫取食处理的幼苗显著低于对照,而取食另外2种处理的幼苗显著高于对照。舞毒蛾幼虫取食诱导的植物抗性,可影响同一种群后续取食者的解毒机制,这是植物抗性和昆虫种内竞争的综合表现。茉莉酸甲酯作为一种外源植物激素,可诱导植物产生抗性,且有效抑制后续取食者的解毒作用,其作用强度与作用时间与舞毒蛾幼虫取食处理极为相似。茉莉酸甲酯可作为有效的植物诱导剂,在害虫...  相似文献   

接种丛枝菌根真菌对小麦根内氮转运蛋白基因表达的影响          下载免费PDF全文

段建锋  田慧  高亚军 《中国土壤与肥料》2016,(2):130-136

通过盆栽试验,研究了在低氮(不施氮)和高氮(施氮0.2 g·kg~(-1))水平下接种不同种类丛枝菌根(AM)真菌[Funneliformis mosseae(BGC-NM03D)、Claroideoglomus etunicatum(BGC-NM01B)和Rhizophagus intraradices(BJ09)]对小麦生长、氮吸收及根内4个硝态氮转运蛋白(NRT)基因、1个辅助蛋白(NAR)基因和2个铵态氮转运蛋白(AMT)基因表达的影响。结果表明,3种AM真菌均能够侵染小麦根系,以R.intraradices菌根的侵染率最高;接种R.intraradices或C.etunicatum能够显著提高小麦的生物量或地上部氮吸收量;无论是高氮还是低氮处理,接种AM真菌后均显著下调了小麦根内NRT、NAR和AMT基因的表达水平,且不同AM真菌调控小麦根内氮转运蛋白基因表达的能力具有明显差异。  相似文献   

奶牛酪蛋白αs1基因片段的扩增及泌乳素对其基因表达的影响   总被引：3，自引：1，他引：3  

赵学军  吴慧慧  张才乔  刘建新  吴跃明 《农业生物技术学报》2005,13(5):629-634

从泌乳中国黑白花奶牛的乳腺组织中提取基因组RNA，根据报道的奶牛酪蛋白αs1 mRNA序列设计其上、下游引物，用RT-PCR进行cDNA扩增，获得1条434bp的片段。测序分析结果表明，该片段为奶牛酪蛋白αs1 cDNA的部分序列，编码130个氨基酸组成的多肽；除一个碱基发生变异外，其余部分与报道的乳腺酪蛋白αs1cDNA序列完全一致。以此为基础，并以GAPDH为内标，研究了不同浓度泌乳素对旋转培养下奶牛乳腺组织酪蛋白αs1基因表达的影响。结果表明，奶牛乳腺组织在培养24h后，泌乳素为10μg／mL组的酪蛋白αs1基因表达水平最高，且显著高于对照组和2．5μg/mL组（P〈0．01），而与5．0和7．5μg／mL组之间差异不显著（P〉0．05）；对照组与2．5、5．0和7．5μg／mL组之间，2．5μg／mL组与5．0、7．5和10．0μg／mL之间差异均极显著（P〈0．01），而5．0μg／mL以上的3组之间差异不显著（P〉0．05）。结果提示，泌乳素的添加浓度以5．0μg／mL为佳。  相似文献   

四种甘蓝雄性不育类型差异基因表达分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

康俊根  张国裕  张延国  娄平  王晓武  方智远 《农业生物技术学报》2006,14(4):551-554

通过cDNA-AFLP分析了4种甘蓝(Brassicaoleracea)雄性不育类型的花粉败育特异中断基因表达特点,并对不同特异表达类型分别选取代表性TDFs克隆测序。结果表明,表达差异在转录片段多态性上能反应出不同雄性不育类型在细胞学水平上的败育时期和特征差异,4种不育类型中萝卜胞质不育(OguCMS)与可育类型遗传距离最近。实验未检出萝卜胞质不育特异中断的TDFs,说明其特异中断基因数目较少,因此检测到这一类基因较为困难。三种代表黑芥胞质不育(NiCMS),隐性核不育(Ms-cr1)和显性核不育(Ms-cd1)特异中断表达的TDFs共计46条。序列分析结果表明,黑芥胞质不育,隐性核不育和显性核不育类型分别与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶,具RNA识别结构域(RRM)的蛋白,质膜类钙转运ATP酶基因表达受阻有关。  相似文献   

三角帆蚌Rab3 cDNA全长克隆及其原核表达   总被引：2，自引：1，他引：1  

许宝红肖调义  刘巧林苏建明  陈开健刘敏 周伟 《中国农学通报》2011,27(29):64-71

根据三角帆蚌消减杂交cDNA文库获得的EST序列,运用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术获得三角帆蚌Rab3基因的全长cDNA序列（GenBank登录号为HQ190954）。序列全长1707 bp,开放阅读框666 bp,编码221个氨基酸,5’端非编码区为158 bp,3’端非编码区为883 bp。软件推测其编码蛋白相对分子量为24.92 KDa。NCBI Blastp进行氨基酸序列同源性分析表明,与居蟹皮海绵（Suberites domuncula）的Rab-3like（SdRab3）氨基酸相似性最高,为64%,构建进化树的结论也是先与居蟹皮海绵的Rab3-like（SdRab3）聚为一支。根据获得的Rab3基因cDNA全长序列,设计特异性引物扩增获得完整开放阅读框序列,并将已克隆到的三角帆蚌Rab3开放阅读框定向插入原核表达载体PQE-His质粒中,转化大肠杆菌BL21（DE3）。在30℃,5 h,1 mM IPTG的诱导条件下,Rab3蛋白得到高效表达,重组菌体经裂解和SDS-PAGE电泳分析,发现一条26 kDa左右特异的蛋白表达条带,其表达量约占菌体总蛋白30%。Western-blot检测表明,在健康组和病变三角帆蚌肝脏中,Rab3蛋白与β-actin的表达量比值分别为0.438和0.580。这一结果说明,Rab3基因在三角帆蚌经病原菌侵染后,表达量上调,且已有研究表明Rab3有通过调节中性粒细胞的胞吐作用来抵抗细菌侵入、防止机体感染的功能,从而初步推测三角帆蚌Rab3蛋白可能与三角帆蚌瘟病有关。  相似文献   

甜菜nia基因的克隆及不同氮素形态诱导的差异表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

丁广洲  侯静  陈丽  马凤鸣  陈连江 《作物学报》2011,37(11):1949-1955

利用同源序列克隆方法从二倍体甜菜品种Ty7中获得氮素诱导nia基因片段,通过RACE技术克隆nia基因全长序列,该基因ORF长度2 718 bp,编码905个氨基酸,并已在GenBank上登录(EU163265),基因组中nia以低拷贝数存在。nia编码蛋白的等电点为6.12,推测分子量为102 kD,以NADH为电子供体。为揭示不同氮素形态和处理对甜菜nia基因表达的影响,采用半定量PCR方法检测不同氮素形态诱导nia基因mRNA的表达,同时测定酶活力。结果表明,当铵态氮诱导nia基因时,低浓度的铵离子能促进基因的表达,过高浓度的铵离子抑制基因的表达。当硝态氮诱导nia基因时,随处理浓度的增加,nia的表达加强,呈正相关关系。用30 mmol L^–1硝态氮诱导4 h后,nia基因表达达最高值,约在6 h后,表达明显下降。  相似文献