马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化     

高彦萍  张武  王国祥  席春艳  吴雁斌  梁宏杰  吕和平 《植物保护》2019,45(6):259-264

马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H_2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。  相似文献   

红富士苹果芽变系DNA甲基化研究     

杜晓云  宋来庆  赵玲玲  刘美英  唐岩  孙燕霞  姜中武    束怀瑞 《园艺学报》2019,46(1):107-120

以35份富士苹果(Malus×domestica Borkh.‘Fuji’)芽变材料为试材,利用甲基化敏感扩增多态性(Methylation Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)分析和UPGMA聚类方法,对其基因组甲基化修饰水平、变异模式以及表观遗传变异关系进行研究。结果表明:(1)不同富士系得到不同的MSAP扩增,总DNA甲基化水平27.90%～36.16%,平均32.87%,双链全甲基化为主要甲基化方式;(2)富士芽变材料绝大多数位点保持了原有甲基化模式;(3)绝大多数芽变(68.57%)检测到全部的甲基化变异模式(12种),去甲基化频率极显著高于甲基化频率(P <0.01),且CG去甲基化极显著高于CHG;(4)36份种质遗传相似系数平均值0.89(0.79～0.92),在聚类图上,富士原种分布在芽变系集中区外,新近发生的芽变系更倾向于聚在一起,着色系片红型和条红型芽变呈分散排布状态。总的来看,富士芽变的甲基化变异模式丰富,超甲基化和去甲基化相伴发生,但以去甲基化为主;‘富士’着色芽变与其最原始品种富士,以及芽变之间发生了较大表观遗传变异;片红和条红型芽变聚类未表现明显偏好性。本研究将为进一步开展富士着色系芽变机理研究提供指导,可以CG去甲基化为切入点展开深入研究。  相似文献   

灰葡萄孢对腐霉利的抗性分子机制及快速检测技术     

郑远  沈瑶  汪汉成  戴德江  沈颖  吴鉴艳  张传清 《农药学学报》2021,23(1):90-96

为明确灰葡萄孢Botrytis cinerea对腐霉利的抗性现状,于2017—2018年采用单孢分离法从浙江省5个地区的草莓大棚共分离获得200个菌株.通过区分剂量法测定了其对腐霉利的抗性,对抗药性菌株的分子机制进行了分析,并根据抗药性分子机制,建立了B.cinerea腐霉利高抗基因型的环介导等温扩增(loop-med...  相似文献   

桂林市猪圆环病毒病流行病学调查研究     

尹丽萍  钟远宣  陆晖 《广西畜牧兽医》2021,37(4):149-153

本研究采集桂林市12县5城区的51家养殖企业的猪血清样本共计543份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体检测.检测结果表明,全市猪场的阳性率为49.02％(25/51),个体阳性率为33.33％(181/543).其中20家年出栏1000头以下企业采集的198份血清样本中有79份样本...  相似文献   

耐药基因bla_TEM-1、bla_IMP-3、fosA3多重重组聚合酶扩增(RPA)快速检测方法的建立和应用     

朱凝瑜  贺泽  梁倩蓉  郑晓叶  丁雪燕  曲道峰 《中国兽医学报》2022,(5):956-961

为了建立同时检测多种耐药基因的快速检测方法,本研究以bla_TEM-1、bla_IMP-3、fosA3基因保守序列设计特异性引物,经优化反应条件,建立恒温检测上述3种耐药基因的多重重组聚合酶扩增(RPA)方法。条件优化结果显示,所建立的RPA方法在引物浓度为480 mmol/L,37℃恒温反应20 min时检测效果最佳。该方法对携带bla_TEM-1、bla_IMP-3、fosA3基因的菌株能扩增出条带,阴性菌株无条带,特异性高;对bla_TEM-1、bla_IMP-3基因的最低检出限为1.8×10¹拷贝/μL,对fosA3基因的最低检出限为1.8×10²拷贝/μL,敏感性较强。用多重RPA方法对浙江省内水产养殖环境及生物体中分离到的400株菌株进行检测,养殖用水分离菌株的bla_TEM-1、bla_IMP-3和fosA3检出率分别为81.00%(81/100),11.00%(11/1...  相似文献   

番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及Mi-1基因检测     

郑积荣  胡浅浅  李戌清 《分子植物育种》2015,(4)

本研究以自育的26份番茄育种种质和抗南方根结线虫番茄品种‘仙客1号’及感南方根结线虫品种‘阿乃兹’为试验材料,采用病土盘栽自然发病鉴定、苗期二龄幼虫人工接种鉴定和PCR扩增及CAPS检测相结合的方法,研究供试材料对南方根结线虫的抗性水平及基因型。鉴定结果表明,供试的28份番茄材料中,高抗17份、抗病6份(包括抗病对照‘仙客1号’)、感病2份、高感3份(包括感病对照‘阿乃兹’),无免疫材料,且病土盘栽鉴定与苗期接种鉴定的结果一致。PCR扩增结果表明,27份番茄材料均能检测到一条750 bp的特异条带;TaqⅠ酶切结果显示,具有酶切位点的22份试材中有15份含纯合显性Mi-1/Mi-1基因、5份含杂合显性Mi-1/mi-1基因、2份含180 bp+250 bp+300 bp三条特异性片段,并且这22份试材对南方根结线虫表现高抗或抗,而其余5份不含显性Mi-1基因的试材则表现高感或感,证明Mi-1是具有抗南方根结线虫能力的基因,分子检测结果与病土盘栽鉴定和苗期接种鉴定的结果吻合率达92.6%;含有180 bp+250 bp+300 bp三条特异性片段的高抗材料可能含有其它抗根结线虫基因。分子检测与抗性鉴定相结合,能为创制抗南方根结线虫新种质提供一种更加省时、省力且经济有效的科学育种方法,可为番茄抗南方根结线虫育种提供理论依据和实践经验。  相似文献   

pH值对重金属Pb~(2+)吸附特性的影响     

乔冬梅  庞鸿宾  齐学斌  樊涛  赵志娟  樊向阳  朱东海 《灌溉排水学报》2010,29(6)

以砂壤土为研究对象,采用1次平衡法,研究了pH值对重金属Pb2+吸附特性的影响,在此基础上对等温吸附进行模拟分析。结果表明,土壤对Pb2+吸附的pH值影响敏感阈值范围为pH7。所引入的平衡质量体积比与吸附量之间的模型ln(S)=K1×CK2能较好地模拟不同pH值条件下的等温吸附规律。其次为Freundilich模型,Henry模型较适用于低pH值条件下的模拟分析。  相似文献   

一个新的植被参数化方案研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈万隆  邵海燕 《生态农业研究》2000,8(1):67-72

为定量描述土壤－植被－大气连续体的热量及水分交换,建立了以有效比湿等为基础且具普适性的植被参数化方案－－１种等温大叶模式。利用拉萨、狮泉河和南京３个试验站的气象观测资料验证并由此计算的感热通量和潜热通量以及净辐射量、土壤温度等观测结果进行比分析表明,该植被参数化方案成功地反映了下垫面的水、热传输特征。  相似文献   

氧化还原条件对土壤磷素固定与释放的影响   总被引：35，自引：2，他引：35  

张桃林  高超  吴蔚东 《土壤学报》2002,39(4):542-549

为探讨水稻土由氧化环境转为还原条件时对土壤磷素固定与释放的影响,选择18种水稻土样品进行室内模拟实验,通过测定不同条件下磷的等温吸附曲线和采用氧化铁试纸测定法进行多次提取以对比淹水前后土壤磷的累计解吸量,发现大部分供试样品的固磷能力在淹水条件下有了显著的提高,全部样品在淹水后磷的释放量都有不同程度的减少。进一步的研究表明淹水条件下土壤对磷的固定与释放的变化主要与淹水后土壤Eh的降低和pH的升高而导致的大量无定形铁的形成有关。  相似文献   

不同动物部分组织基因组甲基化程度的差异分析   总被引：10，自引：1，他引：10  

唐韶青  张沅  徐青  孙东晓  俞英 《农业生物技术学报》2006,14(4):507-510

应用甲基敏感扩增多态性(MSAP)技术,检测和分析了猪、牛、羊、小鼠、鸡和鸭基因组的甲基化程度。结果表明,对CCGG位点,实验中检测的几种动物的甲基化程度多数在0.40￣0.50之间(不包括牛);不同动物来源相同组织基因组的甲基化程度不同,相同动物不同组织基因组的甲基化模式具有特异性;同一种动物,组织基因组的甲基化程度一般都高于血液基因组;另外,哺乳动物与禽类基因组甲基化程度未发现较大的差别,但哺乳动物基因组全甲基化位点较多,半甲基化位点较少。  相似文献