巴西橡胶树叶肉细胞原生质体中细胞骨架结构及动态观察     

王倩男  张晓东  罗红丽  安邦 《热带作物学报》2018,39(3):494-501

细胞骨架通过结构的重排在植物响应逆境胁迫的过程中起着重要作用。本研究克隆真菌微丝结合蛋白的一段保守结构域lifeact及小鼠MAP4的微管结合结构域MBD,构建与荧光蛋白EGFP融合表达的瞬时表达载体,利用原生质体瞬时表达体系成功观察到了橡胶树叶肉细胞中微丝和微管骨架的结构,并通过对原生质体细胞进行不同处理观察胞内微丝和微管骨架的结构变化。此外,本研究还成功的捕捉到橡胶树原生质体细胞中微丝及微管的动态行为。   相似文献   

甘蓝枯萎病菌原生质体的制备与再生条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

李伶俐 严红李兴红  姜于兰向红琼杨腊英  燕继晔 《中国农学通报》2011,27(10):203-207

建立甘蓝枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp. conglutinans）高效遗传转化体系的途径之一是获得其具有再生功能的原生质体。本研究通过对甘蓝枯萎病菌菌丝摇培时间、菌丝的酶解时间、保护原生质体的渗透压稳定剂的种类和浓度等因素进行优化,建立了制备甘蓝枯萎病菌原生质体的高效、稳定体系,并在SR固体培养基上实现了甘蓝枯萎病菌原生质体的再生,再生率可达21.13%。该体系的获得将为下一步甘蓝枯萎病菌高效遗传转化体系的建立和致病机理的解析奠定基础。  相似文献   

酿酒葡萄‘桂葡1号’幼叶原生质体分离研究     

唐文忠 廖芬黄茂康  卢塔山黄伟雄 《中国农学通报》2011,27(31):200-204

研究酿酒葡萄‘桂葡1号’幼叶原生质体的最佳分离条件。以‘桂葡1号’20~30日龄无菌苗幼叶为分离原生质体试材,对分离过程中酶液组合、酶解时间、稳定剂浓度、纯化时离心速度及离心时间进行比较分析。酶组合以2%纤维素酶+0.5%果胶酶为宜。随着酶解时间的延长,原生质体的产量逐渐增高,适合‘桂葡1号’幼叶原生质体的酶解时间以8 h为宜。在0.45~0.55 mol/L的甘露醇范围内,随浓度提高,原生质的产率明显上升,0.55 mol/L时达到最大2.48×106个/(g?FW),活力为79.78%。在悬浮纯化原生质体时,以1000 rpm离心6~8 min的效果较好。分离材料的适宜酶液组合为2% Celluasw Onozuka R-10+0.5% PectolyaseY-23+25 mmol/L MES+0.55 mol/L甘露醇,解离时间以8 h为宜。悬浮纯化时,蔗糖浓度以30%、1000 r/min离心6~8 min效果较好。  相似文献   

蛹虫草原生质体的制备与再生   总被引：1，自引：0，他引：1  

周礼红  罗丽美 《湖北农业科学》2009,48(7)

为了建立原生质体介导的蛹虫草遗传转化系统,考察了各种细胞壁裂解酶和渗透压稳定剂等对蛹虫草原生质体形成和再生的影响.蛹虫革菌丝体形成和释放原生质体最适裂解酶和酶解时间分别为:1%Cellulase,30℃作用2 h;最适渗透压稳定剂是0.8mol·L-1MgSO4;最适合原生质体再生的培养基为含0.6mol·L-1蔗糖的PDA培养基.原生质体液涂布双层再生培养基的方法再生率最高,为4.38%.  相似文献   

枯草芽孢杆菌Snb2原生质体制备和再生研究     

王媛媛  段玉玺  陈立杰  朱晓峰 《沈阳农业大学学报》2011,42(1):110-113

研究了青霉素、甘氨酸、溶菌酶浓度、酶解温度、菌龄、再生培养基对生防芽孢杆菌Snb2原生质体的形成与再生的影响。培养液中青霉素和甘氨酸的终含量分别为0.3%和1.0%时,菌株Snb2的生长量最佳;菌株原生质体形成的最佳条件是,溶菌酶浓度为2.0mg·mL-1,酶解温度为35℃,生产原生质体的最佳菌龄为对数生长中期;在最佳再生培养基HCNB培养基上,原生质体再生率为66.0%。  相似文献   

球孢白僵菌原生质体制备和再生条件     

李姝江  朱天辉  韩珊  谯天敏  闫晓星  李芳莲  冯民富 《四川农业大学学报》2011,29(1)

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]经液体培养后,采用酶解方法制备其菌丝原生质体,并采取单因素实验对再生条件进行了研究。结果表明,经纤维素酶制备球孢白僵菌原生质体后,再生的最佳条件是:用L-broth培养基培养球孢白僵菌78h,KCl 0.8mol/L(再生用蔗糖0.6mol/L),柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为缓冲系统,纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5:2.5:2.5(mg/mL),在32℃水浴中酶解3h(pH自然)。  相似文献   

Transient Expression of Exogenous Gene into Plant Cell Mediated by PEI Nanovector     

LI Ying  CUI Hai-xin  SONG Yu  LI Yao  HUANG Jin-li 《中国农业科学(英文版)》2011,10(6):820-826

This study was carried out to investigate the transfection effect of exogenous gene into plant protoplast cell mediated by polyethylenimine (PEI) nanovector, based on PEI gene delivery system in the field of medical science. PEI/DNA complexes were prepared by using PEI polymer to bind the plant expression plasmid, pCMI205-GFPn. The ability of PEI combining and protecting DNA was investigated by agarose gel electrophoresis retardation assay. The surface characteristics of PEI/DNA complexes were observed with transmission electron microscope. The transfection efficiency of Arabidopsis thaliana protoplasts mediated by PEI/DNA complexes at different N/P ratios was analyzed based on observation of transient expression of green fluorescent protein with confocal laser scanning microscope. PEI could bind and condense DNA, and form stable 100-200 nm PEI/DNA complexes when the proportion of PEI and DNA is in the range of 5:1-1:4.Transfection efficiency of PEI/DNA complexes increased with N/P ratios in range of N/P＜5 and reached the highest at N/P=5, and began to decrease beyond N/P＞5 as higher toxicity to cells. The transfection efficiency of PEI/DNA complexes at N/P=5 was higher than PEG. This study confirmed that PEI nanovector could effectively mediate foreign gene entering into A. thaliana protoplast cell to obtain transient expression, which may be developed as a hopeful and novel transgenic method combined with plant protoplast regeneration.  相似文献   

原生质体融合选育耐高温耐盐红螺菌的研究     

谢航  陈婕  邱宏端 《上海水产大学学报》2011,(6)

为选育耐高温耐盐红螺菌用于其粉状制剂研制,以降解水产养殖水体亚硝基氮功能达90%以上的耐盐红螺菌与能在60～70℃下生长的嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株,通过正交试验探讨2种菌株的原生质体融合条件。分别对融合子进行温度、生长盐度和净化水质等功能测定,检出性能较优的融合子,同时采用电镜、细胞色素吸收光谱等方法,将融合子优良株与2种亲株进行比较鉴别。实验结果表明,2种菌株原生质体融合的最优条件为温度37℃,作用时间3 h,聚乙二醇(PEG)浓度为40%。在该优化条件下原生质体融合率为1.536%,筛选获得3株能在30～50℃良好生长的融合子(a、b、c)。融合子生长耐受温度较耐盐红螺菌亲株提高66%,但耐受盐度、降解养殖水体氨氮与亚硝基氮功能均与耐盐红螺菌亲株相近。其中融合子a菌株具有生长更快、性能更稳定的特点,其细胞形态特征、革兰氏染色属性、色素吸收峰等均与耐盐红螺菌相似。  相似文献   

Enhancement of Arachidonic Acid Production by Mortierella isabellina Through Protoplast Regeneration Mutagenesis     

LI Lina  YU Changqing  HAN Yuxi 《东北农业大学学报(英文版)》2011,18(2)

A developed method was used for the enhancement of arachidonic acid production by M. isabellina. An orthogonal, rotatable and central composite design was applied to determine the optimum conditions for protoplast regeneration mutagenesis. The results showed that a commixture enzyme (cellulase and glusulase) at the concentration of 4%, enzymolysis temperature at 30℃ and enzymolysis time on 7.5 h were the optimal conditions, in which the lethality of M. isabellina spores was 78.4%. After mutagenesis and re-s...  相似文献   

草地早熟禾种间原生质体电融合条件的研究     

牛奎举  张然  赵春旭  马晖玲 《草原与草坪》2017,(5):30-34,40

为改良培育草地早熟禾(Poa pratensis)新品种,拟建立草地早熟禾商用品种与具有优良性状的野生早地早熟禾种间原生质体融合体系。采用电融合法,研究了电融合仪的电场条件和原生质体密度对草地早熟禾种间原生质体融合的影响。结果表明:在交流电场强度和频率分别为20 V/cm和2000k Hz时,原生质体可在较短的时间内形成2~4个原生质体串;最适于草地早熟禾种间原生质体融合的直流脉冲强度为200 V/cm、DC幅宽为40μs、直流脉冲次数为3次,原生质体密度为3×105个/m L,在此条件下,草地早熟禾种间原生质体总融合率和一对一融合率可分别达到25.39%和12.27%。  相似文献