黄鳝微卫星引物筛选及其在保护遗传学上的应用   总被引：16，自引：1，他引：15  

鲁双庆 《水产学报》2005,29(5):612-618

研究了远缘种鲤的微卫星引物对黄鳝的适用性。结果显示,31对鲤微卫星引物中有11对引物能对黄鳝DNA模饭扩增出特异性带谱。每对引物扩增的等位基因数在3～13个,平均每个位点有5．6个等位基因,显示了较高的多态性。其中引物P1最理想,其PCR扩增产物能区分来自湖南、广东和孟加拉3个不同地域的黄鳝种群。应用微卫星技术对3个不同地域的黄鳝基因组DNA多态性分析结果显示,湖南、广东和孟加拉黄鳝群体内平均相似率依次为95．5％,95.8％和93．5％,平均变异度依次为0．045,0．042,0．063。群体间的相似率及变异度分析显示：湖南黄鳝和广东黄鳝群体间平均相似率为91．0％,变异度为0．045;湖南黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为55．7％和0．443;广东黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为58．6％和0．414。综合微卫星分析结果、黄鳝的外形特征及地理位置,可以推测,广东黄鳝与湖南黄鳝为同一个生物种的不同地理种群,而孟加拉黄鳝为同属中另一个种。  相似文献   

橡胶树SRAP体系优化及其PCR引物组合的筛选     

王惠君  王文泉  卢诚  王海燕  陈新 《贵州农业科学》2015,(2):29-34

为橡胶树遗传多样性分析及遗传图谱的构建奠定基础,分析引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA用量、Taq酶用量等因素对SRAP-PCR扩增反应的影响。结果表明,橡胶树SRAP-PCR的适宜扩增反应体系(20μL)为:引物0.2μmol/L,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs 0.20mmol/L,模板DNA50ng,Taq酶0.5U。利用该体系从400对引物组合中初筛出28组多态性好的引物组合,获得250条清晰带,多态性比率为62.8%。  相似文献   

基于沙棘转录组序列开发EST-SSR分子标记   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

李珊珊  曾艳飞  何彩云  张建国 《林业科学研究》2017,30(1):69-74

[目的]本研究通过对蒙古沙棘"向阳"品种的转录组序列进行SSR引物开发,为沙棘亲本分析、遗传多样性和遗传育种等研究提供支持。[方法]利用已测得的转录组序列进行分析和筛选,整理具有SSR位点的序列,进行引物设计,随机挑选179条引物进行验证。[结果]得到具有SSR位点的EST序列17 383条,其中,单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸重复基元分别占62.77%、21.82%和13.77%;二核苷酸重复基元类型以AT和AG为主,三核苷酸重复基元类型以AAG、ATC和ATA为主。9 291条序列设计出扩增EST-SSR位点的引物,随机合成的179对引物中,142对扩增成功,选取其中92个位点的扩增产物上机检测,40个SSR位点(43.48%)呈现多态。对扩增稳定且峰图清晰的17个多态位点的进一步分析,得到蒙古沙棘天然群体在各位点的观测杂合度(HO)为0.083 0.875,期望杂合度(HE)为0.180 0.750。[结论]本研究开发出的EST-SSR标记,为后期进行沙棘属植物遗传多样性分析、遗传图谱构建及分子育种等研究提供了重要支持。  相似文献   

SSR标记鉴定玉米品种亲子关系的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

沈童伟  陆徐忠  刘勋辉  李莉  杨剑波 《农业科学与技术》2009,10(4):55-60

1材料与方法 1．1材料选取我国主要推广的16个玉米杂交组合及其双亲以及主要杂种优势群中的202个骨干自交系,其中185份自交系为中国玉米核心种质材料。种子严格隔离保纯,纯度99．9％以上。种子30℃发苗取其部分叶片提取DNA。  相似文献   

玉米Ubiquitin启动子的克隆及功能鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

王昌涛  梁粤  王欢  张宝石  赵琦  张世煌 《沈阳农业大学学报》2006,37(1):9-12

根据Cornejo发表的Ubiquitin启动子的序列,设计引物从玉米自交系18红中克隆出该启动子,测序证明与发表的序列具有98%的同源性,并构建了带有该启动子和GUS基因的植物表达载体,将重组质粒导入农杆菌LBA4404,用农杆菌介导法转入烟草和小麦愈伤中,通过GUS染色反应,证明克隆的启动子在单子叶和双子叶植物中均有活性。  相似文献   

甘肃党参中花生茎线虫的鉴定与记述     

倪春辉  李惠霞  刘永刚  韩变  石明明  魏雪娟  李文豪  徐雪芬 《华南农业大学学报》2022,43(4):99-105

【目的】明确甘肃省渭源县党参Codonopsis pilosula病样中的茎线虫种类。【方法】采用形态学特征、ITS-rDNA与28S-rDNA序列系统发育分析、特异性引物PCR扩增、PCR-ITS-RFLP相结合的方法进行种类鉴定。【结果】甘肃省党参茎线虫群体形态特征与花生茎线虫Ditylenchus arachis相似,形态测量均值虽存在差异,但是范围值基本一致;系统发育分析显示,该线虫与花生茎线虫聚为一支,特异性引物PCR扩增片段、PCR-ITS-RFLP图谱均与花生茎线虫相同。【结论】结合形态特征与分子特征分析,将甘肃党参茎线虫群体鉴定为花生茎线虫,表明该线虫已在甘肃发生分布。  相似文献   

苹果黑星病菌的分子检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

商蓓  付洁  罗泽青 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,38(8):104-110

【目的】建立苹果黑星病菌(Venturia inaequalis(Cooke)Wint)的分子检测方法,以提高检测精确度,缩短检测时间。【方法】根据苹果黑星病菌与其他苹果病原真菌核糖体基因转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列间的差异,设计了1对特异性引物320A/320B,用于苹果黑星病菌的分子检测,对特异性引物扩增条件进行了优化,并验证和检验了引物的特异性和灵敏度。【结果】特异性引物的扩增条带约为320bp,优化的反应体系为:2μL MgCl2(25mmol/L),2.5μL 10×buffer,3μL dNTP(2.5mmol/L),1.2 μL引物320A/320B(10μmol/L),0.5μL聚合酶(5U/μL),1μL模版DNA(30ng/μL),加ddH2O至总体积25μL;反应程序为:94℃3min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;72℃延伸10min。利用该对特异性引物对包括苹果黑星病菌在内的26个苹果病原菌菌株基因组DNA进行的PCR扩增表明,只有苹果黑星病菌能扩增到1条约320bp的特异性条带,其他菌株及阴性对照的扩增产物均未检测到特异性条带。对接种苹果黑星病菌的苹果组织的检测表明,该对引物能特异性地检测到苹果黑星病菌的存在,其对苹果黑星病菌基因组DNA检测的灵敏度为100fp/μL。【结论】利用设计的特异性引物320A/320B,参考正交试验优化的体系和程序,结合简单的SDS法提取苹果黑星病菌基因组DNA,在1个工作日内即可完成对该病原菌的分子检测。  相似文献   

沿海地区钢结构的腐蚀及防腐涂层     

张洪奎  张宁  曹旦夫 《油气储运》2012,31(2):135-138,167,168

介绍了沿海地区油罐和钢结构的腐蚀现状,并对沿海地区的腐蚀环境进行分析。针对传统沿海户外钢结构溶剂型涂层存在的不利于健康、安全、环保,防渗漏、机械磨损和耐化学品性能差,不具备耐粘污和自清洁性能,户外涂层施工周期长,对施工环境要求高等缺点,研发了一种由无溶剂防腐底漆和纳米无机硅氧烷抗粘污面漆组成的新型涂层配套体系。该体系具有施工简便,配套涂料的密闭性、耐候性、耐盐雾性、耐矿石粉尘冲刷性、耐粘污性、自清洁性好等优点,适用于沿海储罐、埋地管道及钢结构的长效防腐涂装,部分产品已成功应用于舟山国家石油战略储备基地等油罐群的涂装,具有广阔的推广应用前景。  相似文献   

地衣芽孢杆菌16S-ITS标记及其特异性分析     

陈冲  佟建明  张潞生 《农业科学与技术》2011,(11):1572-1573,1588

[目的]建立地衣芽孢杆菌的分子鉴定方法。[方法]通过对地衣芽孢杆菌TS-01的16S和ITS序列进行克隆测序和差异性分析,以该区序列为靶序列设计地衣芽孢菌TS-01的特异性引物,并用该引物扩增全部受试菌种。[结果]从ITS和16Sr DNA区间设计了地衣芽孢杆菌种特异性引物,特异性引物PCR的最佳退火温度为67.2℃,循环数为24个;地衣芽孢杆菌TS-01可扩增出1条905bp的标记片段,其他受试菌株均为阴性,从而证明试验得到了在种水平上对该菌种进行准确鉴定的特异16S-ITS标记。[结论]地衣芽孢杆菌TS-01分子鉴定方法的建立,为地衣芽孢杆菌的分子诊断奠定了基础。  相似文献   

蜡梅AFLP反应体系优化及引物筛选     

赵明晓  冯志敏  胡湛  赵振利  范国强 《河南农业大学学报》2011,45(5)

通过对影响AFLP反应体系主要因素的优化,建立了蜡梅的AFLP反应体系,并筛选出了适宜该体系分析的引物.结果表明,20μL蜡梅AFLP最佳酶切体系为模板600 ng DNA,3 U Pst I和3 U Mse I,在37℃下双酶切2 h;在20μL最佳连接体系中酶切产物为15μL,3 U T4连接酶,0.25μmol.L-1 Pst I接头,2.5μmol.L-1 Mse I接头,1μL 10×T4 Buffer,在22℃下连接10 h;在20μL最佳预扩反应体系中稀释10倍的连接产5μL,2.0mmol.L-1 Mg2+,2 U Taq酶,300μmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGA/M+ATC);在20μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释20倍的预扩增产物,2.0 mmol.L-1的Mg2+,2 U Taq酶,300μmol.L-1 dNTP,0.5μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGA/M+ATC).最后,利用上面的体系筛选出了96对适宜于蜡梅AFLP分析的引物.  相似文献