麻鸭白细胞介素17的原核表达及鉴定     

赵雯  潘志明  耿士忠  康喜龙  方强  丛秋霞  焦新安 《中国预防兽医学报》2011,33(5)

为表达麻鸭白介素17(duIL-17),本研究提取ConA刺激的麻鸭脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增duIL-17基因片段,将该片段插入克隆载体pCR2.1中构建重组质粒pCR2.1-duIL17.将duIL-17基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-duIL17,将其转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达.测序结果显示,duIL-17与参考序列(EU366165.1)相比较第174位碱基由C突变为T,并且为沉默突变.SDS-PAGE和western blot分析显示,诱导表达的重组蛋白GST-duIL17主要以包涵体形式存在,分子量大小约为45 ku,duIL-17与抗鸡IL-17抗体具有良好反应性.本研究为制备duIL-17单克隆抗体提供了实验依据.  相似文献   

乙肝病毒基因在转基因小鼠中高效表达的研究   总被引：1，自引：1，他引：1  

耿士忠  鞠辉明  杨跃飞  成勇 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2002,23(4):12-14

采用传统育种方法,将整合含有人类乙肝病毒(HBV)基因的转基因小鼠通过近交和远交的育种方法,获得纯合子小鼠,收集由纯合子小鼠产生的双重杂合子小鼠及后代小鼠的血清,用竞争PCR联合产物酶联杂交技术定量测定血清中的HBVDNA量。结果表明:相对于单纯杂合子小鼠,纯合子小鼠的表达量增高不明显,而双重杂合子小鼠的表达量有明显提高。将双重杂合子再进行杂交传代,其后代也有增高趋势。  相似文献   

禽源大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的检测   总被引：1，自引：1，他引：0  

张维秋  潘渭涓  陈祥  耿士忠  黄金林  潘志明  焦新安 《动物医学进展》2010,31(Z1)

从我国部分地区病、死家禽中分离到大肠埃希菌403株。按照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对其中的344株分离株进行药敏纸片试验;根据GenBank上发表的序列,设计并合成了五对引物,对所有分离细菌进行质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的扩增:qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-ib-cr和qepA。1993年-1996年禽源大肠埃希菌分离株仅对萘啶酸的耐药率超过60%;2001年-2008年禽源大肠埃希菌分离株对1-3代7种喹诺酮类药物的耐药率均超过58%。在403株禽源大肠埃希菌中共检出3(0.7%)株qnrB阳性菌株,2(0.5%)株qnrS阳性菌株,5(1.2%)株aac(6′)-ib-cr阳性菌株以及5(1.2%)株qepA阳性菌株,未检测到qnrA阳性菌株。结果显示,近20年来,我国禽源大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药性不断上升,同时,质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因在禽源大肠埃希菌中呈不断上升的流行趋势。  相似文献   

新城疫病毒F基因在大肠杆菌中的高效表达及其免疫原性分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

游猛  潘志明  耿士忠  文科  陈俊华  张磊  方强  蔡雯婷  焦新安 《中国家禽》2009,31(20)

应用PCR技术,以含有新城疫病毒F48E8株全长融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pVAX1-F为模板,扩增出594bp大小的F基因的部分片段.经克隆筛选和测序后,构建成重组原核表达质粒pGEX-6P-1-F.重组质粒转化表达菌BL21,获得重组菌BL21(pGEX-6P-1-F).经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,F基因在原核表达体系中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的23%.Western blotting结果显示,在相对分子质量46 ku位置有特异性条带.动物实验结果表明,F蛋白免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体效价显著高于空白对照组(P＜0.05),说明原核表达系统表达的F蛋白具有良好的免疫原性.  相似文献   

不同杂交方式获得高效表达乙肝病毒基因转基因小鼠   总被引：1，自引：0，他引：1  

耿士忠  曾显营  鞠辉明  杨跃飞  成勇 《畜牧兽医学报》2005,36(7):744-746

转基因动物普遍存在转基因效率低、表达水平不高并且外源基因遗传不稳定等问题。根据传统育种原理，笔者在已经得到的转基因动物基础上，寻找比原代外源基因表达水平更高的后代，不仅可解决上述问题，而且可以节约成本，缩短获得高效表达转基因动物的时间。本研究是以繁殖周期短，易操作，较经济的小鼠作为试验模型，对已整合有人的乙肝病毒(Hepatitis B Virus，HBV)基因的小鼠进行近交和远交的方法进行选育，并对选育的后代进行外源基因的整合检测以及对小鼠血清中表达的外源基因进行定量检测，表明获得了高效表达的转基因小鼠，从而为以后的转基因动物研制提供了实践和科学依据。  相似文献   

产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究     

颜卫  焦新安  潘志明  耿士忠  黄金林 《江苏农业科学》2012,40(1):46-48

建立产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法,对单核细胞李斯特菌的PFGE技术进行优化,以期获得条带亮度和清晰度都理想的脉冲图谱以及包含较多信息的分析结果;13株单核细胞李斯特菌经PFGE分析获得菌株的遗传进化树和相似性距阵.本研究建立的PFGE分型方法,为单核细胞李斯特菌的溯源追踪提供了很好的技术平台,对于其他革兰氏阳性菌PFGE分型方法的探索也具有重要的参考价值.  相似文献   

家鹅Myostatin 基因3′-UTR序列分析   总被引：1，自引：4，他引：1  

杨凤萍  王金玉  陈义权  李其松  耿士忠  张柳  沈华 《畜牧兽医学报》2006,37(6):550-554

利用家鹅Myostatin基因第3外显子设计上游引物、家鸡Myostatin 3′-UTR设计下游引物,PCR扩增并克隆出家鹅该基因 3′-UTR长1 064bp DNA序列.该序列具有一个polyA 加尾信号序列（TAATAAA）,并富含连续的TTTT高保守区.分析家鹅与其他12个物种该序列的同源性发现,其与家鸡的同源性最高,达87.1%,与鱼类的最低（《11%）.以13个物种Myostatin 3′-UTR构建的分子进化树表明,3′UTR能够为动物进化提供一定信息,但适用于较低分类阶元.  相似文献   

肠炎沙门菌与鸡蛋:污染机制、危害分析及生物防控     

李卓阳  郭荣显  孟闯  张云增  耿士忠  焦新安  潘志明 《中国家禽》2018,(17)

肠炎沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,在全球范围内广泛流行,严重威胁公共卫生和食品安全。食用被污染的鸡蛋或蛋制品是人类感染肠炎沙门菌最主要的原因。肠炎沙门菌可通过水平传播和垂直传播两种途径污染鸡蛋,并且能够利用其独特的分子调节机制逃避蛋清内抗菌成分的杀伤,表现出比其他血清型更强的蛋内增殖能力。鸡蛋内沙门菌的检测是保证消费安全的关键。疫苗免疫和噬菌体应用是降低肠炎沙门菌在蛋内污染,控制病原进入食物链的有效措施。  相似文献   

复合活菌剂在肉鸡生产中的应用     

杨建春  刘建风  何榕  林玮  耿士忠  王传斌 《中国禽业导刊》1998,(1)

复合活菌剂在肉鸡生产中的应用＠杨建春＠刘建风＠何榕＠林玮＠耿士忠￥江苏省里下河农科所畜禽室＠王传斌￥扬州大学农学院复合活菌剂在肉鸡生产中的应用■杨建春刘建风何榕林玮耿士忠（江苏省里下河农科所畜禽室２２５００９）■王传斌（扬州大学农学院）一．前言使用抗菌素防...  相似文献   

禽流感病毒H5和H9亚型多重RT-PCR快速检测方法的建立     

耿士忠  曾显营  潘志明  黄金林  焦新安  刘秀梵 《中国兽医学报》2006,26(2):160-161

根据禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）和血凝素（HA）基因序列，设计1对用来鉴定A型AIV特异性引物（NP—F,NP—R）和2对用来鉴定AIV H5和H9不同亚型特异性引物（H5-F，H5-R；H9-F，H9-R），建立了多重RT—PCR快速检测方法。该方法能同时从一种病毒扩增出2条核酸带。分别为型（NP：330bp）和亚型（H5A：550bp，或H9A：490bp）。通过对105份样品进行检测。并与病毒分离及琼脂扩散（AGP）血清学方法作平行对比，两者之间符合率达100％；试验灵敏度为10^2ELD50。结果表明，建立的多重RT—PCR为检测H5、H9亚型AIV提供了一种快速、经济、易行的技术。  相似文献