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柑橘品种鉴定的SSR标记开发和指纹图谱库构建 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】筛选出一套SSR核心引物,用于构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,为柑橘种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供技术支撑。【方法】以柑橘属8个主要栽培种类为试材进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出多态性丰富、扩增条带稳定的引物对部分参试品种进行PCR扩增,扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进一步的引物筛选;筛选得到的引物进行荧光标记,并选用部分柑橘品种进行PCR扩增,扩增产物利用基因分析仪检测,分别计算各引物的PIC值、等位基因数目,选取一套多态性丰富的适合进行荧光毛细管电泳检测的SSR引物组合,进而对所有参试品种进行分析,构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,同时利用筛选的SSR标记对参试品种进行鉴定。【结果】初期以柑橘属8个种的代表品种(太田椪柑、沙田柚、沅江酸橙、大红甜橙、邓肯葡萄柚、枸橼、费米耐劳柠檬和墨西哥来檬)为材料,用362对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经4%琼脂糖凝胶电泳检测,初步筛选出80对种间多态性高、扩增稳定的SSR引物;进一步从8个种类里选择不同类型的64个柑橘品种,用上述筛选出的80对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,再筛选出60对品种类型间多态性高、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并分别进行荧光标记;另以168份柑橘品种为材料对上述60对SSR引物进行PCR扩增,经荧光毛细管电泳检测,依据各引物的PIC值、等位基因数目、峰图读取难易程度、扩增稳定性及染色体位置等,最终筛选出21对SSR引物作为指纹图谱库构建的核心引物。为消除不同仪器、不同试验批次等引起的误差,为21对SSR引物各主要等位变异选择相应的参照品种。根据各引物标记的荧光颜色及扩增片段大小进行合理组合,21对SSR引物可分成5组进行多重电泳,共采集500份柑橘品种的DNA指纹。利用SSR标记,有111份品种仅用1对引物即可鉴别,86份品种用2对引物组合即可鉴别,24份品种用3对引物组合即可鉴别,另外279份品种虽无法单独一一鉴别,但可分为87个小组,组内品种无法区分,组间品种易鉴别。【结论】利用筛选出的21对SSR核心引物,构建了包含500份柑橘品种的DNA指纹图谱库,筛选出部分品种的特异标记,可以鉴别221份柑橘品种和87个品种组合,构建了基于毛细管电泳平台的柑橘SSR分子标记品种鉴定体系。 相似文献
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为了探究枸橼对柑橘溃疡病(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)的抗性遗传规律,以感溃疡病品种红心柚为母本,与抗溃疡病种质美国枸橼进行杂交,获得了F1代杂种,并以F1自交后获得了F2代。对F1杂种进行活体叶片注射接种鉴定,对所有F2代253株进行离体叶片注射接种鉴定,随后对其中的225株F2活体叶片进行注射接种鉴定,并对部分F2代活体叶片接种后进行溃疡病菌定量分析。鉴定结果表明,红心柚和美国枸橼杂交获得的75个F1全部为感病,没有抗感性状分离。对253株F2植株离体叶片鉴定结果显示,76株表现为抗病,177株表现为感病。对225株F2植株活体叶片鉴定结果显示,72株为感病,症状与感病品种‘冰糖橙’类似;118株为较感病,发病程度较‘冰糖橙’轻,与感病亲本红心柚的病症相似;10株为较抗病,抗性接近于抗病亲本美国枸橼;4株为抗病,抗性与抗病种质... 相似文献
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柑橘溃疡病致病基因PthA核定位信号肽抗血清制备及其抑菌的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列,并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上,经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS),其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达,并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠,制备了相应的抗血清,Western Blotting和ELISA分析结果表明,抗血清可特异地结合重组多肽,亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白,获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片,发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程,且病斑比对照小,但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。 相似文献
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研究不同比例的苜蓿干草和裹包青贮甜高粱混合饲草对肉羊育肥效果的影响,筛选适宜的饲草搭配比例,以降低饲草成本,提高养殖效益,缓解饲草供需矛盾。设置苜蓿干草和裹包青贮甜高粱(折算为干物质)的质量比分别为1∶0、7∶3、3∶2、1∶1、2∶3、3∶7、0∶1的7组混合饲草,选择体况中等、发育良好、健康无病、体重相近的3~4月龄70只小尾寒羊,按照试验要求随机分为7组进行单圈饲喂,每组每天饲喂一种比例的混合饲草30kg、精料8kg,正试期60d,每天测定采食量,每10d测定体质量增加情况。苜蓿干草和裹包青贮甜高粱混合饲喂肉羊,可产生较好的育肥效果,但综合考虑采食量、体质量增加和经济效益分析结果,认为苜蓿干草和裹包青贮甜高粱(折算为干物质)质量比为1∶1是各饲草组合中的最佳组合,只均日增重0.192kg,经济效益132.2元,较饲喂苜蓿干草0.179kg、39.55元分别增加7.26%、92.65元,较饲喂裹包青贮甜高粱0.132kg、74.2元分别增加45.45%、58元。苜蓿干草和裹包青贮甜高粱(折算为干物质)按适宜质量比混合饲喂肉羊,可显著提高肉羊日增质量和经济效益,2种饲草的最佳混合质量比为1∶1。 相似文献
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<正>红豆草是定西市仅次于紫花苜蓿的第二大当家牧草,累计留床面积约1.447×104hm2,每年种植面积2×103～3.33×103hm2。随着畜草产业的发展及其生态工程建设的加快,种植面积还会继续扩大。但红豆草苗期易受害虫危害,由于对虫害防治不当或不及时, 相似文献
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肌纤维是构成肌肉的基本单位。肌纤维的生长快慢、粗细直接影响肌肉的增长速度和肉品质。肌纤维随品种、年龄、营养和肌肉的活动情况而不同。诸多学者对肌纤维细度的研究较多,但对初生雏鸡和不同年龄间肌纤维细度变化的资料较少。本试验采用剥离法,对不同年龄蛋鸡和肉鸡的肌肉纤维进行测定,结果如下:一、材料与方法采用甘肃农业大学鸡场种蛋孵出的1日龄京白蛋鸡、星布罗肉鸡和56日龄成年星布罗肉鸡。屠宰后,取胸、腿肉样,用10%甲醛固定,选纤维中段,用利刃切取2—3mm 肉样,置表面皿中,滴20%硝酸1滴,待8小时后,以甘油包埋,用大衣针仔细剥离肌纤维至肉眼可见到微细草根丝状物出现为止。然后用显微镜测定肌纤维横径,每个样本不重复测100个肌纤维直径,进行统计处理。 相似文献
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