飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′的抗体制备及组织定位     

张睿  张学尧  赵小明  马恩波  张建珍 《中国农业科学》2022,55(2):329-338

【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗（Locusta migratoria）蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础。【方法】首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5′的氨基酸序列,选取LmKnk3-5′的3段特异抗原序列R1、R2和R3,设计包含BamH I、Hind III酶切位点的引物,以LmKnk3-5′全长cDNA为模板,PCR获得LmKnk3-5′的特异抗原片段;然后将特异抗原片段与pET-32a经双酶切、T4连接酶连接、测序验证、成功构建重组质粒后,转入BL21（DE3）表达菌株中,加入IPTG（终浓度0.5 mmol·L^-1）低温（16℃）诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况;接着扩大培养可在菌体裂解液的上清中表达重组融合蛋白的大肠杆菌,提取蛋白并用Ni-NTA对其进行纯化,之后再用纯化后的重组特异抗原免疫小鼠4次,获得anti-LmKnk3-5′多克隆抗体,ELISA法对其进行效价检测,并用Western blot法检测其特异性。取飞蝗5龄若虫第8天表皮,制备石蜡切片,通过免疫组化法对LmKnk3-5′蛋白进行组织定位。【结果】通过氨基酸序列比对,选取LmKnk3-5′的特异抗原区域R1、R2和R3,分别包含208、147和131个氨基酸残基,蛋白理论分子量分别为24.0、17.0和14.8 kD。酶切连接后,成功获得 pET-32a-R1、pET-32a-R2 和pET-32a-R3重组质粒。诱导表达检测,发现只有含pET-32a-R2的表达菌在菌体裂解液的上清液中大量表达重组蛋白。将其扩大培养纯化后获得 R2重组融合蛋白,免疫小鼠取抗血清进行效价检测,抗体效价高达1﹕512 000,可满足抗体使用需求。Western blot结果表明,注射dsLmKnk3-5′后飞蝗体壁LmKnk3-5′的蛋白表达显著减少,表明anti-LmKnk3-5′抗体特异性良好。免疫组化试验结果表明,表皮蛋白LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁皮细胞及新表皮中均有分布,特别是新合成的外表皮顶端。【结论】成功获得飞蝗LmKnk3-5′多克隆抗体,证明其特异性良好。LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁新合成的外表皮顶端分布较多。研究结果为飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′功能研究提供了蛋白水平的证据。  相似文献   

浅谈水稻育秧基质研究进展     

李睿  沈枫  李跃东  张悦  张睿 《北方水稻》2014,(3):79-80

本文对生物质资源、矿物质资源及其二者混合等不同类型育秧基质的研究进展进行了简要介绍,分析了基质存在的主要问题并提出对策,为水稻育秧基质的研究提出了可行性的建议。  相似文献   

河套灌区参考作物蒸发蒸腾量估算方法研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

王旭明  刘海军  张睿昊  李艳 《上海交通大学学报(农业科学版)》2014,(3):95-101

参考作物蒸发蒸腾量（ET₀）是计算作物需水量的基础,一般用FAO推荐的Penman-Monteith公式（PM公式）计算。但是在河套灌区部分地区缺少辐射数据的观测,因而无法利用PM公式计算ET₀。本文选用河套灌区临河气象站1990—2012年的气象资料,分析了利用PM公式计算参考作物蒸发蒸腾量ET₀与气象要素的关系,发现对ET₀影响最大的气象因素为净辐射,其次为饱和水气压差和平均温度。建立了基于饱和水气压差、温度和风速的ET₀估算公式,验证结算显示相关系数、纳什效率系数和总量平衡系数分别为0.96、0.92、1.00。在风速缺测的条件下,也建立了基于饱和水汽压差和温度的ET₀估算公式。以上两个公式为河套灌区缺资料条件下ET₀的估算提供了简单且准确的估算方法。  相似文献   

树型喷洒靶标外形轮廓探测方法   总被引：10，自引：9，他引：1  

翟长远  赵春江  王秀  邹伟  毛益进  张睿 《农业工程学报》2010,26(12):173-177

为了在线探测靶标外形并为变量喷药提供基础支持,研究了树型喷洒靶标外形轮廓探测方法。该文基于超声传感器搭建了靶标外形轮廓探测试验平台,该平台能够驱动步进电机精确匀速运动,以0.02 m为步长密集测量树冠形状,将获得的数据传给计算机实时显示,并能够在Access数据库中长期存储。使用该测试平台针对自制规则树树冠和花期樱桃树树冠分别进行了试验。试验结果显示规则树冠和樱桃树冠体积探测精度分别为92.8%和90.0%,表明该方法具有较高探测精度。  相似文献   

北海道黄杨叶片应答低温胁迫的蛋白质组分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

郝强  张睿鹂  冷平生  关雪莲 《园艺学报》2011,38(11):2169-2179

 采用双向电泳的蛋白质组学方法分析了北海道黄杨叶片蛋白质对低温胁迫的应答反应。北海道黄杨植株在室外种植，从2008年10月—2009年2月每月提取叶片总蛋白。在考马斯亮蓝染色的2-DE胶上发现36个表达量显著差异蛋白点，其中通过质谱鉴定出19个蛋白质，包括已知的和新鉴定的低温胁迫相关蛋白质。这些鉴定出的蛋白质涉及多个生理过程，如能量与代谢、调控、防御应答等，同时这些蛋白质的表达模式与生理生化变化模式相一致。  相似文献   

费乌瑞它马铃薯还原糖含量的测定     

刘文英  刘建霞  韩斌  张睿 《农业与技术》2013,(10):1-1,26

山西省马铃薯栽培种植以中晚熟品种为主，费鸟瑞它马铃薯是一个早熟、抗病、高产、优质的荷兰引进品种，比山西省当地马铃薯传统品种早上市35—60do本实验以费鸟瑞它马铃薯为实验材料，对其进行还原糖含量的测定，并用苯酚—l硫酸法对还原糖含量进行分析。实验结果为：费乌瑞它还原糖OD值为2．046。为后期费鸟瑞它马铃薯遗传性状改良以及马铃薯的深加工提供实验基础。  相似文献   

四倍体刺槐嫁接苗培育技术   总被引：5，自引：0，他引：5  

撒文清  魏安智  张睿  杨途熙  杨恒  李青锋  刘济军  王洪宽 《陕西林业科技》2003,(1):77-79

四倍体刺槐是韩国山林厅林木育种研究所应用植物倍性育种技术 ,通过人工诱变使刺槐体细胞染色体加倍 (2 n=2 0 ;4n=41 )选育成功的刺槐优良无性系 ,由于多倍体的巨体作用 ,使该品系相对于普通二倍体刺槐表现出生长迅速 ,叶片肥大 ,生物量大 ,茎叶中蛋白质、脂肪等营养物质含量高的特点 ,非常适宜作为营造优质饲料林 [1 ] (养殖鹿、羊、兔等食草动物 )及营造速生丰产用材林、薪炭林、防护林。引进我国后 ,生产上大多采用根段扦插育苗 ,此法繁育系数较低 ,成苗慢。为加快良种苗木的繁育进程 ,探索育苗新途径 ,从 2 0 0 0年开始我们在陕西关中…  相似文献   

奶牛前臂神经炎的诊治     

王晓宇  宣立峰  张睿 《畜牧与饲料科学》2007,28(1):12-12

前臂神经炎一般多发生于奶牛。由于春季奶牛饲料饲草单一，造成前胃弛缓，消化能力降低，使瘤胃内B族维生素合成减少，引起外周神经营养不良，功能减弱而引发炎症，使奶牛运动机能障碍。奶牛前肢作为运动的重要支点，所以更易发生前臂神经炎。由于该病多散发，且很少见，发病缓慢，持续时间长，多会误诊为风湿性疾病而耽误治疗。笔者用中西医结合的方法治愈了该类病牛。  相似文献   

日光温室杏树高效栽培技术   总被引：4，自引：0，他引：4  

杨恒  魏安智  杨途熙  撒文清  张睿 《陕西林业科技》2003,(3):77-79

介绍了日光温室杏树高效栽培中的园地选择、设施结构、品种选择、高标准定植、肥水管理、整形修剪、花果管理、环境调控、病虫害防治方面的关键技术，阐述了人工授粉，激素处理，环割、人工疏果方面的花果管理技术，总结出了不同生育阶段日光温室杏树栽培管理的温湿度标准。  相似文献   

耕牛前臂神经炎的治疗     

李冰  张睿  宣立峰  董志富 《中国牛业科学》2003,29(1):49-49

前臂神经炎一般多发于奶牛.但春季耕牛使役过度,饲料饲草单一,造成前胃弛缓,消化能力降低,使瘤胃内B族维生素合成减少,引起外周神经营养不良,功能减弱而引发炎症,使动物运动机能障碍.前肢作为运动的重要支点,所以更易发生前臂神经炎.由于本病多散发,且很少见,发病缓慢,持续时间长,多会误诊为风湿性疾病而耽误治疗.2000年春用中西医结合法治愈此类病牛,报告如下.  相似文献