从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究     

范运峰  赵启祖  赵耘  邹兴启  张仲秋  王琴  宁宜宝 《中国畜牧兽医》2009,36(6):56-60

以携带猪瘟病毒Thiverval株全长cDNA克隆的pAC/F101/T1-7载体质粒为模板,在体外转录病毒基因组RNA,并转染PK-15和BHK-21细胞,通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,成功地在两种细胞中拯救出具有感染性的病毒粒子。同时,通过2种细胞转染效率的对比试验,成功建立了利用高转染效率的其它真核细胞作为病毒拯救的过渡细胞,然后再在猪肾细胞系上进行增殖的病毒拯救方式,极大提高了猪瘟病毒拯救的效率。  相似文献   

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析     

赵耘  陈博文 《中国农业大学学报》1999,4(C00):77-82

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ  相似文献   

基于QuickBird卫星影像的昆明市主城区绿地景观评价研究     

周黎霞  赵耘 《绿色大世界》2012,(2):36-37

以QuickBird卫星影像信息源为基础,在面向对象分析软件eCoginition的支持下,对昆明市主城区的绿地景观进行了自动提取,并作了景观分析评价及建议。研究结果可为昆明园林管理部门提供技术支撑。  相似文献   

国内部分猪瘟病毒流行株抗原性分析     

王琴  赵耘  范学政  徐璐  张正兴  陈锴  宁宜宝  丘惠深  王在时 《中国预防兽医学报》2012,34(6):436-439

为分析我国猪瘟病毒(CSFV)流行株的抗原性差异及其与特异性单克隆抗体(MAb)反应性之间的关系,本研究采用CSFV强弱毒鉴别MAb通过ELISA方法对我国流行的29株分离株进行抗原反应性研究,结果显示针对弱毒株MAb(MAb11)除3株为阳性外,其余均为阴性;而这些分离株可以被强毒MAb(MAb56)分为强反应和弱反应两组。同时对29株分离株E2基因的190 nt进行同源性分析,并将其分为3个亚群,即1.1、2.1和2.2;氨基酸序列具有一致独特的位点差异规律,强反应组(761G、764L)和弱反应组(761R或K、764P)分别具有2个独特的差异位点。推测761G和764L是针对MAb56与CSFV抗原结合的关键位点。  相似文献   

猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救   总被引：3，自引：0，他引：3  

范运峰  赵启祖  赵耘  邹兴启  徐璐  张仲秋  王琴  宁宜宝 《畜牧兽医学报》2009,40(9)

采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序.经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5'和3'末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(HH)核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T1-7.利用T7 RNA聚合酶将线性化重组质粒pAC/F101/T1-7体外转录成基因组RNA,再使用脂质体转染将体外转录RNA转染PK-15细胞.通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,表明成功的从感染性克隆拯救出活病毒粒子.猪瘟病毒低温诱变疫苗"Thiverval"株感染性克隆的构建及病毒的成功拯救,为进一步研究CSFV疫苗株的致弱机制提供了重要工具.  相似文献   

菌种保藏中的细菌鉴定方法   总被引：3，自引：0，他引：3  

杜昕波  赵耘  李伟杰 《中国兽药杂志》2009,43(3)

综述了在菌种保藏工作中目前行业内使用的各种细菌鉴定方法,包括传统方法、仪器的自动化鉴定以及分子生物学方法,并简述了各种方法的原理和优缺点,以期能为行业同仁更好开展菌种保藏、鉴定工作提供帮助.  相似文献   

猪瘟病毒Thiverval株3'非编码区插入片段对病毒拯救的影响     

范运峰  赵启祖  赵耘  邹兴启  张仲秋  王琴  宁宜宝 《中国预防兽医学报》2009,31(6)

猪瘟病毒(CSFV)疫苗株Thiverval株与亲本病毒Alfort株相比,最明显的区别就是其3'-UTR含有一定长度的插入序列.本研究通过反向遗传学操作,构建了3'-UTR含有19 nt、32 nt以及插入片段完全缺失的CSFVThiverval株全长cDNA感染性克隆,将突变病毒基因组进行体外转录,利用BHK-21细胞转染、PK-15细胞传代增殖的方式成功的从3种重组突变感染性克隆中拯救出活病毒粒子,表明CSFV疫苗株3'-UTR插入片段并不影响病毒的拯救.通过3'-UTR二级结构模拟,发现疫苗株的插入片段导致3'-UTR空间构型发生改变、自由能升高、影响二级结构的稳定性,可能是导致疫苗株毒力减弱的原因之一.  相似文献   

猪伪狂犬病血清学诊断概况     

赵耘  李健强 《动物医学进展》1992,(4)

本文根据最近几年来关于猪伪狂犬病的研究资料就猪伪狂犬病的多种血清学诊断方法作了简要综述。  相似文献   

猪瘟野毒不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵耘  宁宜宝  王在时  王琴  张广川  宋立  丘惠深 《动物医学进展》2002,23(6):56-60

利用RT－PCR及序列测定对5株猪瘟野毒14个不同代次毒株E2基因主要抗原编码区序列进行了分析。结果表明每个野毒的不同代次毒株核苷酸及氨基酸序列均呈现较高的保守性，核苷酸及氨基酸序列均无变化，核苷及氨基酸同源性均为100%。与02号野毒相比，其他4株野毒核苷酸及氨基酸同源性分别为82.0%-99.5%、84.1%-98.6%。遗传衍化分析结果表明所有毒株被分成2个基因组，每个基因组又分成2个基因亚组。03、05和22号毒株位于第一基因组，02、06号毒株位于第二基因组。每一个毒株的不同代次毒株均位于同一基因组、同一基因亚组。证实了猪瘟病毒分子结构的遗传稳定性。  相似文献   

猪瘟病毒石门株不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

赵耘  王在时  王琴  李博  丘惠深 《中国兽医杂志》2002,38(7):7-10

利用RT－PCR及序列测定对猪瘟病毒石门株不同代次毒株E2基因主要抗原编码区及同一代次不同年代主要抗原编码区序列进行了分析，结果所有毒株E2基因主要抗原编码区序列呈现较高的同源性，石门株不同代次毒株E2基因主要抗原编码区核苷酸及氨基酸同源性分别为97．7％－100％，97．3％－100％；同一代次不同年代主要抗原编码区序列核苷酸及氨基酸同源性均为98．6％－100％。只有3个代次毒株发生较小的变异，核苷酸及氨基酸呈现1－3个碱基或氨基酸的变异，其他代次的毒株序列完全一致。初步证实了猪瘟病毒分子结构的遗传稳定性，说明猪瘟病毒的变异可能更多的与种群病毒的优势选择有关。  相似文献