ATP5J促进猪繁殖与呼吸综合征病毒复制研究     

王飞飞  刘珂  郇贝丽  欧安妮  魏建超  李蓓蓓  邵东华  邱亚峰  钱莺娟  JUNG Yong-Sam  马志永 《畜牧与兽医》2018,(8)

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制与细胞调控酶ATP5J的关系,本研究首先对猪源ATP5J基因进行了抗原表位分析,选取并合成了3段抗原小肽,制备ATP5J的多克隆的抗体。用制备的多抗检测了ATP5J质粒在293T细胞中过表达的情况。然后,用PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs),利用qPCR和Western blot检测PRRSV感染对PAM细胞中ATP5J表达的影响。最后,我们通过小RNA干扰以及过表达ATP5J,使用qPCR和Western blot技术,在PAM和Marc-145细胞上检测ATP5J变化对PRRSV复制增殖的影响。结果显示:PRRSV感染能够导致宿主细胞ATP5J蛋白表达下调;ATP5J下调时,PRRSV复制减弱;ATP5J过表达时,PRRSV复制增强,说明ATP5J能够促进PRRSV复制增殖。进一步分析证明:ATP5J促进PRRSV复制功能没有剂量依赖性。综上,PRRSV感染能够导致宿主细胞ATP5J蛋白表达下调,而ATP5J具有促进PRRSV复制的作用。该研究为阐明PRRSV与宿主相互作用提供了新思路,为解析PRRSV免疫抑制和免疫逃逸机制奠定了基础。  相似文献   

表达GFP和gpt基因的重组CVI988病毒的构建     

邱亚峰  葛菲菲  曹瑞兵  周斌  马志永  陈溥言 《农业生物技术学报》2009,17(2):183-188

以马立克氏病病毒（MDV）CVI988株基因组为模板,利用PCR技术扩增出约2.7和3.0 kb的基因片段,将上述片段同时插入pUC19中,获得约5.5 kb MDV同源重组臂;以该基因片段的US2区的BglⅡ为插入位点,分别插入基因表达盒CMV-gpt-ployA和CMV-gfp-polyA,构建转移载体pUS-gpt-GFP,将该载体瞬时转染CHO细胞,在荧光显微镜下,可以观察到绿色荧光蛋白的表达;将该转移载体转染已用MDV CVI998株感染的次代CEF细胞,利用MX-HAT培养基筛选重组病毒,并用荧光显微镜挑选表达绿色荧光蛋白的蚀斑,结果获得重组病毒rMDVgptGFP。通过PCR检测和病毒生长测定,证明重组病毒获得纯化。  相似文献   

流行性乙型脑炎病原生态学的研究概况     

邓绪芳  史子学  邱亚峰  沈阳  邵东华  马志永 《动物医学进展》2011,32(2):111-114

流行性乙型脑炎也称日本脑炎(简称乙型脑炎或乙脑),是由日本脑炎病毒(JEV)经媒介蚊虫传播的严重的人兽共患病.JEV能侵害人的中枢神经系统,引起病毒性脑炎,具有很高的病死率.JEV的宿主种类众多且自然分布广泛,为了有效地预防乙脑疫情的发生,有必要开展乙脑的病原生态学研究.论文就乙型脑炎的病原学特征、地理分布、自然宿主、...  相似文献   

甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定     

贾园  沈阳  邱亚峰  史子学  邵东华  王晓杜  邓绪芳  王皓婷  赵福广 《动物医学进展》2011,32(5):22-25

构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性.人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因.将扩增的基...  相似文献   

猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用     

王飞飞  刘珂  郇贝丽  魏建超  邵东华  李蓓蓓  邱亚峰  石元元  钱莺娟  马志永  JUNG Yong-Sam 《中国动物传染病学报》2018,(3)

根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R20.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。  相似文献   

PML-NBs参与干扰素介导的细胞先天性免疫抗病毒反应     

李向东  沈阳  邱亚峰  马志永 《中国预防兽医学报》2009,31(6)

早幼粒细胞白血病(Promyelocytic leukemia,PML)蛋白最初发现于急性粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)中,与染色体的移位密切相关[1].  相似文献   

表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定     

付宁宁  肖长广  陈梦莉  邱亚峰  李宗杰  李蓓蓓  刘珂  邵东华  马志永  魏建超 《畜牧与兽医》2023,(12):105-110

旨在通过慢病毒表达系统构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N蛋白的Marc-145细胞系。以PRRSV SH1株感染性克隆质粒为模板，通过PCR扩增N基因，并将其克隆到慢病毒载体中，获得重组慢病毒质粒pSin-Ires-Puro-N,将重组质粒pSin-Ires-Puro-N与辅助质粒psPAS2、pMD2.G、pRSV-Rev共转染293T细胞进行慢病毒包装，获得表达N蛋白的重组慢病毒颗粒并将其感染Marc-145细胞，嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，筛选几代后的细胞采用有限稀释法和终点稀释法获得稳定表达N蛋白的Marc-145细胞系。通过PCR鉴定表明细胞系中存在N蛋白基因，通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验验证N蛋白能在细胞系中能稳定表达。本研究成功构建了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系，为研制PRRSV新型复制缺陷型疫苗奠定基础。  相似文献