超高效液相色谱-串联质谱法测定原料乳中苯并咪唑类药物   总被引：1，自引：0，他引：1  

方忠意 《中国兽药杂志》2009,43(5):17-20

建立了超高效液相色谱—串联四级杆质谱法测定原料奶中苯并咪唑类药物残留量的检测方法。原料奶经乙酸乙酯提取,MCX固相萃取柱净化,用UPLC-MS/MS进行检测。色谱条件为：色谱柱为ACQUITYUPLCTMBEHC18柱（2.1 mm×100 mm,1.7μm）;流动相为：乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。采用ESI正离子模式,多反应监测（MRM）模式检测,外标法定量。本方法检测测苯并咪唑类药物残留的检测限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg。  相似文献   

饲料中孔雀石绿和隐性孔雀石绿含量的液相色谱-串联质谱测定方法     

方忠意  刘素梅  班付国  张发旺  宋志超 《饲料研究》2009,(4)

建立了超高效液相色谱-串联四级杆质谱法测定饲料中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的含量.用乙腈提取,提取液经蒸干浓缩后用中性氧化铝和阳离子交换固相萃取柱净化,使用UPLC-MS/M进行检测.色谱条件: ACQUITY UPLCTM BEH C18柱(2.1 mm×100 mm i.d.,1.7 μm),流动相乙腈 0.1 %甲酸溶液,梯度洗脱流速0.3 mL/min.采用电喷雾串联四极杆质谱检测.结果表明,孔雀石绿和隐性孔雀石绿的浓度为1～500 ng/mL时线形良好,在1～100 μg/kg的添加水平条件下平均回收率为68.5 %～91.6 %,该方法的检测限为1.0 μg/kg.  相似文献   

河南省猪源沙门氏菌分离鉴定、血清分型及药物敏感性分析?     

方忠意  李金磊  董鹏  狄元冉  袁聪  李红婵  高延玲  邱天宝  李梦圆  吴志明 《中国动物检疫》2019,36(4):74-78

为了解河南省猪源沙门氏菌的血清分型和耐药性,从郑州、开封、焦作等5市生猪屠宰场抽取猪盲肠内容物样品840份进行沙门氏菌分离。采用PCR、BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定系统和血清凝集反应对分离菌株进行鉴定,并通过微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析。结果显示:从840份样品中共分离沙门氏菌45株,分离率为5.36%(45/840);分离的沙门氏菌共分为6个血清型,其中德尔卑(Derby)沙门氏菌为优势血清型;分离的沙门氏菌对四环素、磺胺异恶唑、大观霉素、氨苄西林耐药较严重,耐药率分别为82.22%、75.56%、73.33%、73.33%。结果表明:河南省存在一定的猪源沙门氏菌污染,尤其是德尔卑沙门氏菌,需要重点加强控制;沙门氏菌耐药情况较为严重,应进一步规范养殖环节抗菌药物的使用。  相似文献   

饲料中沙门菌检测技术研究进展     

李金磊  舒畅  方忠意  董鹏  狄元冉  李红婵  杨希祥  高延玲  张发旺 《上海畜牧兽医通讯》2019,(4):22-24

饲料中沙门菌是影响畜牧业健康发展和公共安全的重要因素之一。目前饲料中沙门菌的检测方法主要有传统培养法、免疫学检测方法及分子生物学检测法。本文对各种检测方法的原理、应用及优缺点进行概述。  相似文献   

鸽Ⅰ型副粘病毒病的诊断与防治     

方忠意  崔保安  陈红英 《中国兽医杂志》2006,42(11):64-65

2005年10月份，郑州市某肉鸽场发生以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征的传染病，经流行病学调查、病理剖检和实验室诊断，确诊为鸽Ⅰ型副粘病毒感染，报告如下。  相似文献   

应用PCR检测鸡传染性喉气管炎病毒     

陈红英  李新生  张红英  方忠意  王东方  崔保安 《中国畜牧兽医》2007,34(7):83-85

根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列，设计、合成1对引物，应用PCR技术对ILTV以色列疫苗株、河南分离株（ILTV-CG和ILTV-XY）进行PCR扩增，均能扩增出预期大小的目的片段，测序分析和酶切分析证实了PCR产物的特异性，而对其它禽病原体的扩增均为阴性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为21 pg。应用PCR检测人工接种后不同〖JP2〗天数采集的鸡的结膜拭子，接种后第2~5 d均能检测到ILTV。该方法可用于鸡传染性喉气管炎病的诊断和临诊样品检测。  相似文献   

检测禽流感抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立     

陈红英  崔沛  方忠意  李新生  崔保安 《江苏农业学报》2010,26(2)

以大肠杆菌系统表达的H9亚型禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)为抗原包被ELISA板,通过反应条件的筛选,建立检测禽流感抗体的重组核蛋白间接ELISA(NP-ELISA)方法。结果表明,抗原最佳包被质量浓度为7.56μg/ml,血清最适稀释度为1∶160,作用时间为60 min;辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鸡IgG最适稀释度为1∶5 000,血清和酶标抗体最适作用时间为60 min。特异性试验结果表明,NP抗原可与H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体发生反应,经NP-ELISA检测为阳性的H9亚型AI血清样品能够被H9亚型AIV阻断,而NP抗原与新城疫等4种疫病阳性血清不发生反应。对223份待检鸡血清进行检测,NP-ELISA阳性检出率为96.86%(216/223),而血凝抑制试验、琼脂免疫扩散试验结果分别为93.72%(209/223)和81.61%(182/223),表明NP-ELISA是检测禽流感型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒河南株NP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达     

陈红英  方忠意  崔保安 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2009,37(10):19-24

【目的】克隆H9N2亚型禽流感病毒(AIV)河南株核蛋白(NP)基因,并将NP主要抗原表位区在大肠杆菌中进行表达,为禽流感基因工程诊断抗原的制备和开发奠定基础。【方法】根据GenBank公布的禽流感病毒NP基因序列设计引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从H9N2亚型AIV河南株感染的鸡胚尿囊液RNA中扩增AIV河南株NP全基因,将扩增的PCR产物克隆到pGEM-T easy载体并进行测序。通过PCR和酶切方法将NP主要抗原表位区亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达重组蛋白。【结果】测序结果表明,克隆的H9N2亚型AIV河南株NP基因全长为1497bp,包含1个完整读码框,编码498个氨基酸,与GenBank中不同来源、不同亚型的其他7株禽流感病毒NP基因的核苷酸同源性达到95%以上,氨基酸同源性达到98%以上。SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为42 ku的重组蛋白。经1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组蛋白的表达量最高。Western blot分析表明,重组蛋白能够与H9亚型AIV阳性血清发生特异反应。【结论】NP基因非常保守,建立的表达系统能够表达NP蛋白且表达蛋白具有良好的免疫原性。  相似文献   

HPLC法测定麻杏石甘散中甘草酸的含量     

邱天宝  刘素梅  方忠意  班付国  韩立  王丽 《中兽医医药杂志》2013,32(3):26-28

建立HPLC法测定麻杏石甘散中甘草酸含量的方法。色谱柱为Waters XBrigeTMC18（4.6 mm×150 mm,5μm）;以甲醇-0.2 mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（45∶55∶1）为流动相;流速：1.0 mL/min;柱温：30℃;检测波长：250 nm。甘草酸铵的线性范围为43.47-217.40μg,R=0.999 6,平均回收率为92.44%（RSD=1.6%）。本方法快速、简便、准确,能有效测定麻杏石甘散中甘草酸的含量。  相似文献   

高效液相色谱法测定氟苯尼考预混剂中喹诺酮类药物的方法研究     

方忠意  刘素梅 《上海畜牧兽医通讯》2013,(3):8-9

建立了高效液相色谱法检测氟苯尼考预混剂中非法添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的方法。用十八烷基键合硅胶色谱柱,以流动相A（磷酸3．0m1加水至1000ml,用三乙胺调pH值至3．0±0．1,加乙腈50m1）一甲醇（88：12）为流动相,采用二极管阵列检测器,采集波长为200～400nm,分辨率为1．2nm,记录光谱图和283nm波长处的色谱图,流速1．0ml／min,柱温30℃。结果显示,4种喹诺酮类药物的浓度在0．5～200ug／ml范围内呈良好的线性关系,添加回收率在99．2％～100．2％之间,相对标准偏差在0．18％～0．85％之间,检测限0．5mg／g。本方法快速、准确,可用于氟苯尼考预混剂中非法添加喹诺酮类药物的定性和定量检测。  相似文献