牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立     

周毅  吴玉石  段宏安  张睿  周祖涛  毕丁仁  石德时 《畜牧兽医学报》2009,40(4)

从持续感染牛白血病病毒（BLV）的羊胎肾细胞（FLK-BLV）中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env（gp51）基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21（DE3）进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法。结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg.mL^-1,血清的最佳稀释倍数为1∶80,阳性判定标准确定为样品OD450 nm大于0.451。用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%。  相似文献   

青贮芦苇益生菌添加剂配方的筛选     

熊志达  周鑫鑫  杨书敏  王金硕  肖运才  石德时 《中国饲料》2022,1(21):66-71

为研究益生菌复合制剂对芦苇青贮品质的影响，试验以芦苇青贮添加剂为主要研究对象，将处于生长期的芦苇收割后进行青贮，分为4个益生菌添加剂处理组： XS55（将象草发酵剂与副地衣芽孢杆菌SN-6按照5:5的比例混合并添加入饲料）、XS64（象草发酵剂:SN-6=6:4）、XSD（象草发酵剂:SN-6:短小芽孢杆菌D1=5:5:10）、BZSD（布氏乳杆菌:植物乳杆菌:SN-6:D1=1:4:5:10）和1个空白对照组（Ctrl），每组3个重复，青贮周期为20 d。结果表明：（1）通过青贮，各组均有效地保存了芦苇的粗蛋白质含量，达到12.35%以上。（2）与Ctrl组相比，益生菌添加剂各组均显著降低了芦苇的中性洗涤纤维（NDF）含量（P < 0.05）。（3）与Ctrl组相比，益生菌添加剂各组总酸含量均显著提高（P < 0.05）。（4）益生菌添加剂各组中氨态氮/总氮与丁酸/总酸这两种青贮腐败指标的含量均极显著低于Ctrl组（P < 0.001）。综上，XS64组青贮效果最好，按照《青贮感官评定标准》，该组芦苇青贮感官评价为“优”|其营养物质保存良好，粗蛋白质可达到12.06%|pH降至3.93|总酸含量达到5.84%|按照弗里葛评价标准，该青贮组得分为86，在所有组中评分最高|此外，XS64可显著地降低芦苇NDF含量，与未加益生菌青贮组相比，NDF含量降低了约4.75%（P < 0.05），与青贮前芦苇相比，NDF含量降低了6.79%（P < 0.05）。 [关键词] 青贮饲料|益生菌|纤维素降解|芦苇|添加剂  相似文献   

氯霉素抗体的制备   总被引：3，自引：0，他引：3  

石德时  王桂枝等 《华中农业大学学报》2001,20(5):463-465

采用改进的混合酸酐法合成的免疫原氯霉素琥珀酸酯牛血清白蛋白（CAP－HS－BSA），经红外滤谱鉴定后，免疫5只家兔，3个月后，产生合格氯霉素抗血清，用双向琼脂扩散方法测定效价为1：16。此氯霉素（CAP）抗血清与氯霉素半琥珀酸酯和琥珀酸钠氯霉素的交叉反应率分别为850．0％、800．0％，与磺胺二甲嘧啶、磺胺－5－甲氧嘧啶、水溶性氟哌酸、青霉素、链霉素的交叉反应率均小于0．01％。  相似文献