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鸡毒支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：2，他引：0
【目的】建立基于鸡毒支原体种特异性粘附蛋白编码基因pvpA的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的不同国家和地区鸡毒支原体pvpA基因序列,在高度保守区域设计一对引物。以临床分离鸡毒支原体RC1为模板扩增pvpA基因,将其连接到PMD19-T载体,转化至大肠杆菌DH5α中,经PCR和酶切鉴定并测序验证后得到阳性重组质粒rPvpA90。以rPvpA90为模板建立SYBR Green I荧光定量的标准曲线和溶点曲线,并进行特异性,灵敏性,重复性及临床样本检测试验,评价该方法的可行性。【结果】所建立的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶点曲线特异,相关系数为0.990。最低检测限为72拷贝/20 μL ,其敏感性比常规PCR至少高100倍;无论是对不同病原DNA单模板还是几种病原DNA混合模板进行扩增,该方法都呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于2%,表明该方法重现性好;临床样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR检测方法的检测率明显高于常规PCR方法。【结论】本研究初步建立了基于种特异性基因pvpA的鸡毒支原体荧光定量PCR方法,为养禽场诊断和监测鸡毒支原体病原提供一种新的特异、灵敏的方法。 相似文献
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按常规方法提取鸡毒霉形体3株临床分离株和参考株(S6-10)的基因组DNA，扩增各菌株DNA旋转酶gyrA基因片段，并克隆、测序，用DNAsis软件对测序结果进行分析。结果表明，HS1、HS2株均在GyrA亚基第87位发生了Glu87→Gly氨基酸取代，除此之外，耐药水平较高的HS2株还在第83位发生了Ser83→Ile氨基酸取代，而FL分离株虽对氟喹诺酮类药物产生了低水平耐药，但在GyrA亚基未发生任何氨基酸突变。 相似文献
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广东地区鱼源大肠埃希菌ESBLs和PMQR流行分布调查 总被引：1，自引：0，他引：1
从广东地区食用鱼肠道分离鉴定了218株大肠埃希菌,用琼脂稀释法测定218株大肠埃希菌对17种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法调查ESBLs和PMQR基因的流行分布情况.对10株β-内酰胺酶(包括ESBLs)和/或PMQR阳性菌株进行了接合转移试验,探讨ESBLs和PMQR基因的传播机制.敏感性测定结果显示:218株大肠埃希菌对17种抗菌药物的耐药率为0.5%～72.5%.在112株氨苄西林耐药菌株中,检测出2种ESBLs基因,分别为blaCTX-M-79和blaCTX-M-14,2株菌中还检测到β-内酰胺酶基因blaLEN-4和blaLEN-17.在80株环丙沙星耐药菌株中,检测到59株为PMQR阳性,分别为qnrB(33株),qnrD(5株),qnrS(21株),aac(6’)-Ib-cr(6株).接合转移试验结果表明,ESBLs和/或PMQR基因可同时存在于一个质粒上进行转移. 相似文献
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2020年8月从广东省某大型养鸡场不同区域采集粪便、土壤、水体等样品共654份，进行替加环素耐药大肠杆菌的分离鉴定；PCR方法检测替加环素耐药大肠杆菌的tet(X4)基因；PFGE分型检测tet(X4)阳性大肠杆菌的克隆传播情况；采用琼脂二倍稀释法和肉汤二倍稀释法测定tet(X4)阳性大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC);接合转移试验检测tet(X4)水平传播情况。结果显示，共分离得到204株替加环素耐药大肠杆菌，检测出165株tet(X4)阳性大肠杆菌，检出率为25.23%(165/654)。根据菌株来源和分离率，挑选72株进一步研究tet(X4)阳性大肠杆菌在该养鸡场的流行特征。PFGE分型将72株tet(X4)阳性大肠杆菌分为39个簇，表明该养鸡场无明显克隆传播现象。tet(X4)阳性大肠杆菌对替加环素的MIC范围为8～16 mg/L,且表现多重耐药表型，对四环素、多西环素、米诺环素、氨苄西林、氟苯尼考均表现高水平耐药，而对黏菌素、美罗培南均敏感。接合转移试验表明，tet(X4)阳性大肠杆菌主要位于IncHI1型质粒上(93.06%)。结果表明，tet(X4)基因在该养殖场主要随In... 相似文献
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细菌耐药机制及耐药性控制对策 总被引：15，自引：2，他引：13
细菌耐药问题日趋严重，对人类健康造成极大威胁，成为全球关注的热点。细菌耐药机制非常复杂，而且一种耐药菌株同时可具有多种耐药机制。本文对细菌耐药机制及耐药性控制对策的研究进展进行综述，并提出从产生细菌耐药性的根本原因出发、合理使用抗生素、加强基层工作人员的相关医疗知识才是控制细菌耐药性的基本原则。 相似文献
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