斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立   总被引：6，自引：0，他引：6  

马志永  简中友 《中国兽医科技》1997,27(4):3-5

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。  相似文献   

表达GFP和gpt基因的重组CVI988病毒的构建     

邱亚峰  葛菲菲  曹瑞兵  周斌  马志永  陈溥言 《农业生物技术学报》2009,17(2):183-188

以马立克氏病病毒（MDV）CVI988株基因组为模板,利用PCR技术扩增出约2.7和3.0 kb的基因片段,将上述片段同时插入pUC19中,获得约5.5 kb MDV同源重组臂;以该基因片段的US2区的BglⅡ为插入位点,分别插入基因表达盒CMV-gpt-ployA和CMV-gfp-polyA,构建转移载体pUS-gpt-GFP,将该载体瞬时转染CHO细胞,在荧光显微镜下,可以观察到绿色荧光蛋白的表达;将该转移载体转染已用MDV CVI998株感染的次代CEF细胞,利用MX-HAT培养基筛选重组病毒,并用荧光显微镜挑选表达绿色荧光蛋白的蚀斑,结果获得重组病毒rMDVgptGFP。通过PCR检测和病毒生长测定,证明重组病毒获得纯化。  相似文献   

日本脑炎病毒NS3基因截短表达及其在神经细胞定位研究     

邓绪芳  史子学  魏建超  邵东华  王少辉  李蓓蓓  马志永 《中国动物传染病学报》2012,(4):7-12

根据GenBank发表的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因序列,合成用于克隆编码病毒NS3蛋白C端的基因片段(955~1857 bp)的引物。从感染JEV的细胞样品中,采用RT-PCR扩增出大小约900 bp的目的片段,插入到pET-28a(+)表达载体,诱导表达出NS3C蛋白。将该重组蛋白免疫小鼠制备NS3C抗血清,通过间接免疫荧光和Western blot验证,该抗血清能特异识别JEV感染Vero细胞中的NS3蛋白。使用该抗血清研究了JEV在神经细胞内的亚定位,发现NS3主要定位于JEV感染的神经细胞的胞浆中,并在细胞核周围分布明显。  相似文献   

我国兽医公共卫生的现状   总被引：5，自引：0，他引：5  

马志永  丁铲 《兽医导刊》2007,(5):4-6

近年来,SARS、高致病性禽流感、疯牛病、莱姆病等新的人畜共患病不断出现,狂犬病、结核病、血吸虫病、日本乙型脑炎等人畜共患"旧病"又卷土重来,使人们不禁重新思考人畜共患病问题的严重性;而二(噁)英事件、苏丹红事件、大肠杆菌0157中毒、瘦肉精中毒等食品安全事件频频发生,动物源性食品安全问题成为人民高度关注的焦点.  相似文献   

猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用     

王飞飞  刘珂  郇贝丽  魏建超  邵东华  李蓓蓓  邱亚峰  石元元  钱莺娟  马志永  JUNG Yong-Sam 《中国动物传染病学报》2018,(3)

根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R20.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。  相似文献   

仔猪球虫病不只引起腹泻   总被引：1，自引：1，他引：0  

王海燕  李丽  马志永 《国外畜牧学(猪与禽)》2010,30(2):33-35,41

<正>等孢球虫病,也称为仔猪球虫病,是一种感染8～15日龄仔猪的寄生虫病。其最主要的临床特征是感染仔猪发生乳白色水样腹泻和断奶时体重过轻。该病也可以表现为亚临床感染。病原体是猪等孢球虫,具有很强的繁殖  相似文献   

上海禽源弯曲菌对大环内酯类药物的耐药性及其机制研究     

李颖利  李蓓蓓  赵秋华  史子学  魏建超  邵东华  马志永 《中国预防兽医学报》2014,(4):327-330

  相似文献   

沙门氏菌的检测技术进展     

刘喆  张书萧  王少辉  陈晓平  马志永  郭欢欢  田明尧  金宁一 《中国动物传染病学报》2012,(2):81-86

沙门氏菌是影响食品公共安全的重要因素之一。目前沙门氏菌的检测方法主要包括传统方法、以分子生物学为基础的方法、以免疫学为基础的方法、电阻抗法、生物传感器法、噬菌体法以及联合检测方法。本文主要对目前各种检测方法的原理、优缺点、应用情况以及发展前景进行了概述。  相似文献   

不同品种犬表皮生长因子基因的克隆与分子特征分析     

杨传定  魏建超  史子学  邵东华  王少辉  李蓓蓓  王雪敏  马志永 《畜牧与兽医》2013,45(7)

为分析和比较不同品种犬的表皮生长因子(canine epidermal growth factor,cEGF)基因的分子特征及其差异,收集11个常见不同品种犬的血样,提取基因组,采用PCR方法分别扩增出编码cEGF的N端和C端结构域的犬32号染色体20和21号外显子,纯化后与pMDTM18-T Vector连接构建重组子并转化大肠杆菌DH5α感受态,PCR鉴定阳性克隆后送样测序,用20和21号外显子序列拼接出cEGF全长,采用BLAST和DNAStar软件分析序列相互关系特征。结果:成功扩增出11种不同品种犬EGF编码基因,全长为156 bp,编码52个氨基酸,犬EGF基因序列同源性在97.4%～100%之间。根据cEGF编码基因推导氨基酸序列同源性为98.1%～100%,除了杜宾犬(Doberman Pinscher)EGF氨基酸在52位点处R→F,其余的氨基酸序列都一致。cEGF氨基酸序列与几种其他动物及人EGF相比较发现:cEGF与家猫EGF(Felis catus EGF)同源性很高,达到94.2%。表明不同品种犬的EGF编码基因有很高的同源性且非常保守,并与家猫EGF也有很高的同源性。  相似文献   

A型流感病毒新蛋白PB1 F2的研究进展     

王晓杜  马志永 《中国畜牧兽医》2009,36(2):107-108

A型流感病毒主要引起人、禽、猪等的流感,PB1 F2蛋白是一种新发现的流感病毒蛋白,是由病毒基因片段2编码的非结构蛋白,可促进线粒体途径引起的细胞凋亡,其对A型流感病毒的复制和毒力等有重要影响。  相似文献