PRRSV N蛋白抗原肽的预测、合成以及针对该抗原肽抗体的制备和应用     

相笑  张彦兵  石元元  李玉明  刘珂  魏建超  邵东华  李蓓蓓  童光志  马志永  邱亚峰 《中国动物传染病学报》2018,(1)

基于生物信息学、化学合成技术和免疫学技术,利用预测的抗原肽进行抗体的制备已被广泛地应用。本研究探讨了利用预测的抗原肽制备针对PRRSV N蛋白的特异性抗体。首先,利用生物学软件对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白进行抗原性预测,获得一个位于蛋白N端16个氨基酸的候选抗原肽。通过BLAST比对,发现该抗原肽在不同北美型毒株中高度保守。其次,采用Fmoc固相法进行抗原肽合成,并将合成的抗原肽通过MBS法偶联到KLH载体蛋白上。随后,将偶联好的抗原肽与弗氏完全佐剂或不完全佐剂混合,免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并利用IgG亲和层析的方法纯化抗体。最后,利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对抗体的特异性进行检测,结果显示,利用偶联好的抗原肽包被ELISA板,检测抗体的滴度,纯化抗体的滴度超过10~5;Western blot结果显示,该抗体(1∶2000)可以特异地识别PRRSV感染的Marc145细胞中的N蛋白,重要的是该抗体可以与不同毒株反应;IFA检测显示,该纯化的抗体(1∶100)可以检测PRRSV感染的细胞。因此,利用生物信息学软件预测的PRRSV N蛋白的抗原肽,能有效地应用于抗PRRSV N蛋白抗体的制备,制备的抗体不仅为研究PRRSV N蛋白奠定基础,而且为研究PRRSV与细胞相互作用提供了一个有效的工具。  相似文献   

PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞IFITM3基因转录的影响     

李玉明  武专昌  刘珂  马改妮  魏建超  邵东华  李蓓蓓  邱亚峰  石元元  马志永 《中国动物传染病学报》2018,(1)

干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon inducible transmembrane proteins 3,IFITM3)作为抗病毒蛋白可以抑制多种病毒的感染,本研究针对猪IFITM3基因设计特异性引物,构建重组质粒并作为阳性标准品,建立了检测IFITM3基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法最低检出下限为10~2 copies/μL,且线性关系好(R~2≥0.997),敏感性高,特异性强,重复性好,批内、批间变异系数均小于3%。将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)细胞,在不同感染时间对细胞中IFITM3 mRNA进行检测。结果显示,PRRSV感染早期IFITM3转录水平保持不变,在感染后转录水平逐渐升高。IFITM3 mRNA在PRRSV感染PAM过程中转录变化,可能是PRRSV宿主免疫逃逸的机制之一。  相似文献   

温室CO2智能释放系统的设计研究     

刘中华  刘珂  李招弟 《吉林农业科学》2020,45(4):55-57,112

  相似文献   

几种叶面肥对茄子幼苗生长的影响     

张一鸣  刘珂  张嘉欣  王贞  王吉庆 《中国瓜菜》2020,(4):56-59

黄腐酸钾、胺鲜酯和复硝酚钠是重要的生长调节物质,各自作为叶面肥单独应用在生产上取得了良好效果,为了研究其相互复配作为叶面肥组成成分的应用效果,以茄子幼苗为试材,以尿素、磷酸二氢钾、黄腐酸钾、胺鲜酯和复硝酚钠为原料组配成不同配方的叶面肥,以清水为对照,研究了不同配方叶面肥对茄子幼苗生长的影响,结果表明,不同配方叶面肥均有利于促进茄子幼苗地上部的生长,均能明显提高茄子幼苗的壮苗指数,4种叶面肥的壮苗指数与CK相比分别增加了27.26%、15.40%、22.16%、45.42%;在尿素、磷酸二氢钾和黄腐酸钾复配的基础上,添加胺鲜酯或复硝酚钠能明显促进茄子幼苗茎粗的生长,增加幼苗地上部与地下部干鲜质量和幼苗的根体积,但幼苗根长与CK相比分别减少了26.29%、24.19%;添加复硝酚钠处理比添加胺鲜酯的处理增加了11.76%的地下部干质量和4%壮苗指数,初步认为处理T4(尿素3 g·L-1、磷酸二氢钾2 g·L-1、黄腐酸钾0.06 g·L-1、复硝酚钠0.007 g·L-1)对培育茄子壮苗的效果相对较好。  相似文献   

ATP5J促进猪繁殖与呼吸综合征病毒复制研究     

王飞飞  刘珂  郇贝丽  欧安妮  魏建超  李蓓蓓  邵东华  邱亚峰  钱莺娟  JUNG Yong-Sam  马志永 《畜牧与兽医》2018,(8)

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制与细胞调控酶ATP5J的关系,本研究首先对猪源ATP5J基因进行了抗原表位分析,选取并合成了3段抗原小肽,制备ATP5J的多克隆的抗体。用制备的多抗检测了ATP5J质粒在293T细胞中过表达的情况。然后,用PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs),利用qPCR和Western blot检测PRRSV感染对PAM细胞中ATP5J表达的影响。最后,我们通过小RNA干扰以及过表达ATP5J,使用qPCR和Western blot技术,在PAM和Marc-145细胞上检测ATP5J变化对PRRSV复制增殖的影响。结果显示:PRRSV感染能够导致宿主细胞ATP5J蛋白表达下调;ATP5J下调时,PRRSV复制减弱;ATP5J过表达时,PRRSV复制增强,说明ATP5J能够促进PRRSV复制增殖。进一步分析证明:ATP5J促进PRRSV复制功能没有剂量依赖性。综上,PRRSV感染能够导致宿主细胞ATP5J蛋白表达下调,而ATP5J具有促进PRRSV复制的作用。该研究为阐明PRRSV与宿主相互作用提供了新思路,为解析PRRSV免疫抑制和免疫逃逸机制奠定了基础。  相似文献   

棉花光籽基因n_2的精细定位     

李思敏  左东云  程海亮  张友平  王巧连  刘珂  冯晓旭  耿洪伟  宋国立 《棉花学报》2019,(2)

【目的】棉纤维是由胚珠外珠被表皮单细胞经突起并极性伸长而成的,棉花种子上的短绒是由胚珠外珠被表皮单细胞突起而产生的。因此,本研究对棉纤维光籽基因n_2进行定位,旨在为其克隆和功能研究奠定基础。【方法】以海岛棉新海21和陆地棉光籽突变体n_2为亲本构建F_2群体,结合棉花基因组数据,开发简单序列重复标记,定位该基因,获得预测的基因序列,通过实时荧光定量聚合酶链式反应分析候选基因的表达量差异。【结果】光籽基因n_2被定位在染色体A12上,位于标记P61与Z10之间的181 kbp内。该区间共有7个候选基因。实时荧光定量聚合酶链式反应分析显示,候选基因72098在2个亲本中的表达量有显著差异。【结论】本试验精细定位了光籽基因n_2,初步分析了候选基因,为其图位克隆和功能验证奠定了基础。  相似文献   

用气孔保卫细胞周长鉴定辣椒植株的倍性   总被引：3，自引：1，他引：3  

张菊平  周快索  巩振辉  刘珂珂  黄炜  李大伟 《西北农业学报》2007,16(2):133-135,141

以辣椒花药培养的单倍体植株和种子来源的植株为试材，研究两者之间叶片气孔保卫细胞外围周长值的差异。结果表明：单倍体植株与二倍体种子来源植株之间叶片气孔保卫细胞外围周长值的差异极显著，周长值小于103．3μm的为单倍体，大于103．3μm的为二倍体。并且两者在第5片叶中不同部位的气孔保卫细胞外围周长值较稳定，可将其作为鉴定辣椒植株倍性的辅助指标。  相似文献   

十个优美别致的观赏桃品种     

陈修会  刘珂 《农家顾问》2002,(5):25-26

近年，我们从中国农科院郑州果树所、中科院北京植物园、上海园林研究所等单位引进观赏桃20余个，经过观察比较，将几个优美别致的品种介绍如下：  相似文献   

美国优良扁桃品种介绍     

陈修会  李玲  刘珂  张青春  高峰 《山西果树》2002,(2):42-42

近几年山东临沂、泰安、潍坊等地相继引进 1 0余个美国育成的扁桃品种 ,经过观察试验和考察对比。现将综合性状比较优良的几个品种介绍如下。1　那普瑞尔 (Nonpareil)　又名浓帕尔、农富乐。是美国加州的扁桃主栽品种 ,占美国扁桃产量的 5 0 %以上 ,果个大而整齐 ,平均单仁重 1  相似文献   

基于碳足迹评价的低碳经济发展研究     

李昊旻  葛大兵  梁容川  许永立  王意蓉  刘珂  王乐滨 《江西农业学报》2013,(4):112-114,117

在理解碳足迹概念及其影响因子的基础上,构建了碳足迹评价模型。通过《湖南统计年鉴》搜集整理了湖南省各市(州)2008～2011年的相关数据,并按照所构建碳足迹模型进行碳足迹分析,分析了湖南省各市(州)碳足迹的年变化趋势,并阐述了碳足迹与人口数量、产业结构、能源结构之间的关系,最后结合湖南省实际情况,为推动湖南低碳经济高速有效发展提供了几点建议。  相似文献