鸡肠道定殖乳酸杆菌分离鉴定及药物敏感性分析     

李一经  韩乐濛  唐丽杰  马孙婷  布哈里  姜艳平  崔文 《东北农业大学学报》2016,(6):51-59

为筛选分析鸡肠道内定殖乳酸杆菌及其对抗生素药物敏感性,选取健康鸡肠道内容物,利用MRSCa CO3培养基平板,42℃厌氧培养,选择革兰氏阳性、不运动、无芽孢、杆状细菌检测过氧化氢酶、氧化酶和硝酸盐还原活性,糖发酵反应管作生化反应表型鉴定,利用PCR扩增16S r RNA并测定序列。结果表明,获得8株乳酸杆菌,其中包括3株Lactobacillus crispatus、2株Lactobacillus johnsonii、2株Lactobacillus salivarius和1株Lactobacillus saerimneri。8株乳酸杆菌在37和42℃均生长良好;抑菌试验表明,对革兰氏阳性及阴性细菌均有一定抑菌活性。体外粘附试验表明,8株乳酸杆菌均具有一定粘附特性,可在肠道内定殖。抗生素敏感性试验表明,8株乳酸杆菌对多种抗生素敏感。  相似文献   

炔雌醇对大鼠睾丸的毒性与氧化损伤作用     

杨翠军  崔文典  刘芳  马媛媛  高翠  葛剑 《河南农业科学》2012,41(11):150-152

为了研究环境雌激素炔雌醇的生殖毒性与活性氧的关系,按0.1、0.5、1.0、5.0mg/kg的药物剂量对雄性大鼠给药,测定大鼠的睾丸质量、睾丸及血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果表明:随着给药剂量增加,睾丸质量显著下降,睾丸萎缩;睾丸组织和血浆中SOD和GSH-Px水平显著下降。说明炔雌醇的生殖毒性与细胞活性氧(ROS)有关,炔雌醇可能通过降低抗氧化酶的含量,增加ROS的含量,导致生殖损伤。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备     

陈东奇  郑殿重  魏志颖  王莹  李佳璇  崔文  姜艳平  王晓娜  周晗  王丽  乔薪瑗  李一经  唐丽杰  单智夫 《畜牧与兽医》2024,(1):91-97

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果：Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10 240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。  相似文献   

潜伏期马立克氏病病鸡血清I型病毒L—meq、meq基因的比较及遗传分析     

潘风光郑梅竹  邹亚学孙莹艾永兴  崔文璟罗翔丹 张玉静 《中国兽医学报》2007,27(1):43-45,50

从潜伏期感染马立克氏病病毒（MDV）鸡淋巴组织中提取基因组DNA，采用梯度PCR的方法获得MDV的L—meq、meq基因，将其插入pMD18-T克隆载体，经测序并进行了序列分析。结果表明，L—meq、meq基因同源性很高，L—meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L—meq基因消失的原因，试验对L—meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明，L—meq基因中含有9个PRR（proline—rich—reapts）区域，meq中含有6个PRR区域，从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关。该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因，同时也意味着L—meq基因对于潜伏期的维持是必要的。  相似文献   

基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用     

王以欣  王紫薇  汉武娇  王丽  姜艳平  崔文  周晗  乔薪瑗  唐丽杰  李一经  徐义刚 《中国预防兽医学报》2019,(7):710-715

为建立快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究以PEDV的N基因为靶基因,基于双启动寡核苷酸引物(DPO),经过条件优化,建立了检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,DPO引物的有效退火温度范围较宽(45℃~65℃);在测试的10种病毒中仅PEDV为阳性扩增结果,其余病毒为阴性结果,特异性较强;对PEDV质粒标准品的检测限可达1.64×10^1拷贝/μL,敏感性较高;组内、组间重复性结果的变异系数均小于1%,重复性较好。利用该方法对采集的272份临床仔猪腹泻样品(粪便、小肠组织)进行检测,结果显示,共检出PEDV阳性样品39份,阳性率为14.34%,与常规RT-PCR方法检测结果的阳性符合率为92.31%;本研究建立方法检测的阳性样品经PEDV N基因测序鉴定,确实均为PEDV阳性样品。本研究建立的基于DPO引物检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法为PEDV的准确检测和流行病学调查提供技术支持。  相似文献   

地下地膜截水墙--防止黄土梯田梯坎蒸发的抗旱增产技术     

张信宝  孙千里  崔凌峰  杨思炯  崔文琪  常东飞  常春 《水土保持研究》1999,6(2):134-136,173

梯坎蒸发引起的梯田“胁边”现象,严重影响梯田的作物产量。地下地膜截水墙技术可以有效阻断梯田土壤水分向梯坎方向的测向运移,防止梯坎地面蒸发,抗旱保墒,消除“胁边”现象,大幅度提高梯田作物产量。１９９８年陕北米脂的试验表明,采用这一技术,梯田增产幅度可达５７．７％￣８８．６％。  相似文献   

重组猪源罗伊氏乳酸杆菌分泌表达牛乳铁蛋白肽对新生仔猪生长性能的影响以及抗腹泻病毒感染的保护作用研究     

汪昭睿  王雪莹  解伟纯  宋丽影  王晓娜  崔文  姜艳平  周晗  王丽  乔薪瑗  徐义刚  李一经  唐丽杰 《动物营养学报》2022,34(1):159-176

本试验旨在研究分泌表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌对新生仔猪生长性能的影响以及对引起仔猪腹泻的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的保护作用.试验1:选取36头1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪,随机分为3组,分别为重组菌组、空载菌组和对照组,每组12头仔猪,分别口服表达LFCA的重组猪源罗...  相似文献   

叶面喷施枯草芽胞杆菌XF-1防治大白菜根肿病     

何朋杰#  崔文艳#  何鹏飞  袁海  李兴玉  吴毅歆  何月秋 《植物保护》2019,45(1):104-108

为了建立简易、有效的根肿病生防体系,本研究采用浇灌和喷施枯草芽胞杆菌XF-1的绿色荧光蛋白标记菌株XF-1-gfp,测定其在大白菜植株内的定殖能力,并用野生型菌株XF-1发酵液研究其防治根肿病和挽回产量效果。结果表明,叶面喷施XF-1-gfp发酵液后,标记菌在大白菜根、茎、叶等组织内的密度呈现出"先上升后下降最后趋于平稳"的趋势,最终稳定在约10~3 cfu/g组织;盆栽试验结果表明,与空白对照相比,所有处理发病率和病情指数均显著下降,喷施XF-1发酵液后最佳防治效果为56.4%,浇灌化学杀菌剂10%氰霜唑悬浮剂2 000倍液及1×10~7 cfu/mL的XF-1发酵液防效分别为78.6%与70.7%。大田试验结果表明,喷施XF-1发酵液后防治效果达52.6%,与浇灌化学杀菌剂10%氰霜唑悬浮剂(64.6%)及XF-1发酵液(74.0%)相比无显著差异。此外,与空白对照、浇灌10%氰霜唑悬浮剂及XF-1发酵液相比,喷施XF-1发酵液后大白菜单株产量分别增加了74.0%、35.1%及23.6%。试验结果表明叶面喷施XF-1发酵液是一种有效的防控大白菜根肿病及增产增收的方法。  相似文献   

重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析     

刘增素  汪昭睿  王雪莹  姜艳平  崔文  王丽  乔薪瑗  周晗  徐义刚  李一经  唐丽杰 《中国畜牧兽医》2021,48(4):1449-1456

本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素（BoIFN-α）的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性，对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切，将胶回收产物进行连接后，转化大肠杆菌TG1感受态细胞，提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞，用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定，同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右，进行体外抗病毒试验。结果显示，试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363，重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带，表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α（rBoIFN-α）上清与水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）同时作用，用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×10⁶ U/L；通过Alamer Blue法分析可知，加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小；间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光，说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果；实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌，通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性，试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。  相似文献   

单增李斯特菌内化素A分段表达及多克隆抗体的制备     

谢小冬  姜艳平  崔文  乔薪瑗  唐丽杰  刘敏  李一经 《黑龙江畜牧兽医》2015,(3):137-139,237

为了研究单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)Inl A蛋白入侵细胞时各段相关功能,试验采用PCR技术扩增得到L.monocytogenes 08-5923株Inl A基因片段,测序后利用Gen Bank对Inl A氨基酸序列进行分段,分为2个基因片段,即Inl A1(1~1 488 bp)和Inl A2(1 315~2 403 bp),将其分别克隆至原核表达载体p GEX-6P-1中,并转化至宿主菌中诱导表达,表达的重组蛋白经Western-blot和间接ELISA法鉴定,用纯化的重组蛋白分别免疫家兔,并用ELISA法检测家兔多克隆抗体的特异性。结果表明:表达的2种重组蛋白分子质量分别约为79 ku和64 ku,以其制备的多克隆抗体均可与单增李斯特菌Inl A天然蛋白发生反应;2种重组蛋白均能有效诱导抗体反应,其中Inl A2(new flag)诱导产生的抗体效价较高,与单增李斯特菌Inl A天然蛋白结合能力较强。  相似文献