乙脑病毒E蛋白中和表位与结核杆菌hsp70 在大肠杆菌中的融合表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

葛菲菲  刘佩红  王建  沈莉萍  徐锋  孙泉云 《吉林农业大学学报》2008,30(2):208-212

根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373~399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建融合表达载体pet-32a-epitope-hsp70。诱导表达后,将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果表明该融合蛋白以包含体形式存在。将包含体在8 mol/L的尿素中过夜溶解,然后将上清过柱,获得良好的纯化结果。融合蛋白的分子量为94 kD。Western blot显示该蛋白兼具对JEV和结核杆菌热休克蛋白70(M.Thsp70)的特异抗原性。  相似文献   

犬瘟热病毒SH202003株全基因组序列分析     

刘健  白艺兰  鞠厚斌  潘子豪  俞向前  杨显超  朱晓英  葛菲菲  葛杰  于讳茹  陶田谷晟  王建  赵洪进 《中国畜牧兽医》2021,48(7):2559-2568

为了解上海地区犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）遗传变异情况，本研究采用首尾重叠的11对特异性引物，对CDV上海株SH202003进行RT-PCR扩增，将扩增片段进行反复测序，序列拼接后最终获得了SH202003株全基因组序列，应用Lasergene 7.0和Mega 6.0软件对全基因及H基因进行序列分析，并构建系统进化树。结果显示，SH202003株基因组全长为15 690 bp，编码6种结构蛋白（N、P、M、F、H和L），H和L基因间隔序列为CUA，L和5'端尾随序列为CAA，与Hebei株核苷酸和氨基酸相似性最高，达到98.6%和96.6%，与疫苗株核苷酸相似性在92.2%~94.3%，氨基酸相似性只有82.7%~87.0%；全基因进化树中，SH202003株与流行野毒株在同一分支，与疫苗株在不同的分支；H基因同样与Hebei株亲缘关系最近，核苷酸和氨基酸相似性分别为98.7%和99.5%，与疫苗株Snyder Hill、CDV3、Convac及Onderstepoort亲缘关系较远；SH202003株处于Asia-1型分支，属于Asia-1型强毒株；SH202003株具有9个潜在N-糖基化位点，与强毒株Hebei株一致。研究表明，上海株SH202003属于CDV强毒株，为Asia-1型，其H基因序列相对保守，具有9个潜在N-糖基化位点，但是全基因序列存在较多突变，与疫苗株的匹配度较差，可能是免疫犬依然发生犬瘟热的主要原因。  相似文献   

检测猪瘟病毒的商业化荧光PCR试剂盒比对验证     

鞠厚斌  杨德全  葛菲菲  刘健  李鑫  周锦萍 《上海畜牧兽医通讯》2015,(1)

为了比较猪瘟病毒6种荧光PCR检测试剂盒的使用效果,本研究采用标准毒株、疫苗与猪瘟阳性组织3类样品,对这些试剂盒的敏感性、特异性、重复性及有效期符合率进行比较。结果显示,试剂盒差异较大,仅有国外试剂盒和2家国产试剂盒与预期的结果一致,其对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型以及阴性猪样品的核酸无交叉反应,重复性与再现性均为理想,在有效期内检测结果没有发生变化。本研究开展检测猪瘟病毒试剂盒验证试验,这将为猪瘟的病原学诊断及实验室开展其它试剂盒验证提供参考。  相似文献   

上海市犬类狂犬病免疫工作现状、问题及对策     

赵洪进  刘佩红  屠益平  王曲直  沈素芳  唐文红  王建  葛菲菲 《中国动物检疫》2015,32(11):27-29

上海犬类狂犬病免疫工作始于上世纪70年代末。30多年来,通过一系列工作措施的有效落实,狂犬病免疫工作取得了积极成效,有效降低了狂犬病发生风险。本文总结了2011—2014年上海市犬类狂犬病免疫工作成果,分析存在的问题,提出下一步防控对策,为上海市犬类狂犬病防控工作奠定基础。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征与圆环病毒混合感染的诊治     

杨德全  鞠厚斌  沈莉萍  徐锋  葛菲菲  周锦萍  刘佩红 《中国兽医杂志》2011,47(7)

1发病及临床症状上海市某猪场饲养有70日龄左右的仔猪120多头,于2月中旬开始发病,主要病症为体温升高,高烧不退,厌食,呕吐,耳朵、鼻尖呈蓝紫色,严重的腹式呼吸,呼气音重,病危仔猪站立不稳,畏寒怕冷,肌肉震颤。开始有2窝15头发病,9头死亡,后其他猪群也陆续发病,磺胺类药物及头孢菌素类药物  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒上海分离株生物学特性鉴定     

刘健  葛菲菲  鞠厚斌  张维谊  杨德全  周锦萍 《中国家禽》2011,33(21)

本研究采用HA试验、HI试验、EID50试验及抗原差异R值的测定比较分析了上海地区2002～2008年间分离的7株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的抗原性,探讨H9N2亚型AIV上海分离株的抗原性变化和进化关系,为流感疫苗株的合理选择、流感疫情的扑灭提供理论上的指导.  相似文献   

副猪嗜血杆菌上海分离株的生物学特性与基因型分析     

万世平  王建  葛菲菲  刘佩红  齐新永  徐锋  沈莉萍  费荣梅 《畜牧与兽医》2010,42(4)

从培养特性、生化特性和耐药特性等多方面研究了副猪嗜血杆菌(HPS)上海分离株的生物学特性。各分离株因生存环境差异等原因表现出不同的生化和耐药特性,分离菌株对多种药物完全耐药,并且各菌株耐药性各不同。根据16SrRNA序列设计引物建立了目的条带为821bp的特异PCR快速检测方法,并对其产物进行测序鉴定与比对分析,结果表明所有分离株的PCR扩增产物序列比对结果与此前报道的HPS的同源性为97.3%～100%。运用ERIC-PCR扩增建立指纹图谱,通过聚类分析以确定其基因型特征,ERIC-PCR将20株菌分为Ⅰ和Ⅱ2个大类群,分离株均属于Ⅰ群A亚群。快速PCR检测方法的建立和基因型研究为上海地区HPS的监控提供了理论基础,并揭示各分离菌株具有一致的遗传进化背景与方向。  相似文献   

2007～2008年上海地区H9亚型禽流感病毒HA基因序列分析     

刘健  葛菲菲  鞠厚斌  张维谊  周锦萍  刘佩红 《中国兽医寄生虫病》2010,18(4):41-46

对分离自上海活禽批发市场的11株H9亚型禽流感病毒（Arian influenza virus,AIV）（2007年5株、2008年6株）进行了血凝素（hemagglatinin,HA）基因序列的测定,以阐明2007年至2008年上海地区H9 AIV分离株HA基因的遗传变异及分子特征。采集鸡气管和泄殖腔棉拭子样品,将H9亚型荧光RT-PCR试剂盒检测出的阳性样品处理后,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,血凝抑制试验（haemagglutination inhibition,HI）进一步确定HA亚型,通过RT-PCR方法分别扩增了11个毒株的HA基因并进行了序列测定。遗传发生关系分析,这11株分离株均属于Ck/Bei/1/94系。2007年至2008年上海地区H9亚型分离株具有相同的起源,且分子特性相似。  相似文献   

人工感染高致病性PRRSV肺脏的病理学观察和扫描电镜的形态学变化   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘佩红  齐新永  王建  周锦萍  张维谊  刘健  沈莉萍  葛菲菲  徐锋 《上海交通大学学报(农业科学版)》2009,27(2)

通过人工感染高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)察猪肺脏的组织病理学变化以及扫描电镜下的形态学变化.将14头健康猪分成试验组和对照组,用高致病性PRRSV变异株感染试验组10头猪.组织病理学变化表明,攻毒猪在第9天以渗出性炎症为主,第14天出现典型的间质性肺炎变化,第28天肺脏间质性肺炎病变基本消失.扫描电镜观察表明攻毒猪第9天肺泡壁破坏严重,肺泡腔内有大量细胞成分;第14天肺泡壁增厚,肺泡间隔出现大量增生的细胞成分,肺泡内壁粗糙并粘附着许多细胞成分.结合组织病理学和扫描电镜同步观察猪高致病性PRRS肺组织的结构变化为研究高致病性PRRSV侵害肺脏组织的机理开辟了一条新途径.  相似文献   

2018年上海市活禽市场6株H9N2亚型禽流感病毒全基因进化分析     

葛菲菲  吴杰  李鑫  刘健  杨德全  鞠厚斌  周锦萍 《中国动物传染病学报》2021,(2):65-70

为了解上海市活禽市场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株的遗传变异情况,本研究对2018年分离的6株H9N2AIV的8个基因片段进行PCR扩增、克隆和测序,并对获得的HA和NA基因序列进行同源性和关键位点分析。结果显示:6个分离株的HA裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;并对6株分离株HA基因分析了糖基化位点;受体结合位点除198位、202位和203位有变异外,其他位点均保守;226位氨基酸均为L,因此具有与哺乳动物唾液酸α2-6受体结合的特征。此外也对NA基因红细胞结合位点,活性中心以及抗原决定簇进行了分析,在红细胞结合位点403位发生突变,在活性中心(同时为抗原决定簇)143位发生突变,这6株病毒其余位点均保守。HA基因进化树显示,上述6株分离株均属于近几年在中国鸡群中流行的Y280分支。从8个基因片段组成方式分析这6个毒株属于G57基因型。以上研究为H9N2亚型AIV的防控和疫苗研制提供了科学参考。  相似文献