鸡生殖干细胞中Piwi基因的干涉效率     

李志腾  常国斌  徐璐  马腾  陈静  陈蓉  王洪志  刘璐  徐琪  陈国宏 《中国农业科学》2016,49(3):563-472

【目的】针对禽类干细胞研究中,存在转染效率与干涉效率低下的问题,通过比较不同干涉方式对鸡原始生殖细胞（primordial germ cells, PGCs）中Piwi基因的干涉效果,探讨提高禽类生殖干细胞干涉效率的有效方法。为进一步研究Piwi基因参与干细胞自我更新、RNA沉默以及转录后调控过程等生物学功能研究奠定基础。【方法】根据已建立的原代细胞分离技术,分别从健康鸡群的10日龄和4日龄鸡胚中分离成纤维细胞（chicken embryo fibroblast, CEF）与生殖脊,其中CEF作为PGCs细胞的饲养层,生殖脊经Trypsin-EDTA室温下消化获得PGCs细胞,并通过形态学、化学方法（PAS糖原染色、AKP 活性检测）和免疫学方法（TERT抗体、SSEA-1抗体）对其进行鉴定。根据Genbank公布的鸡Piwi基因的mRNA序列（NM_001098852）,利用在线软件分别靶向不同位点设计合成得到3个小片段的stealth siRNAs,并将通用无义序列BLOCK-iT^TM Alexa Fluor® Red Fluorescent Oligo作为荧光素标记的阴性对照siRNA。同时,在线设计三条干扰序列和一条非特异性阴性对照序列,将其插入线性化空载体 pRNA-U6.1,构建不同的shRNA干涉载体。分别采用不同类型的转染试剂将构建好的siRNA和shRNA转染PGCs细胞。首先利用通用无义siRNA以及仅带有GFP荧光标记基因的shRNA载体作为阴性对照,检测siRNA和shRNA转染效率,确定最佳转染条件。其次,将试验组siRNA和shRNA在优化条件下转染PGCs细胞,分别收集转染了24、48、72和144 h这4个时间点的细胞,提取各个时间段的总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测Piwi基因mRNA表达水平,并用SPSS软件分析不同处理组的差异。【结果】在对原代分离的PGCs细胞进行了形态学、化学以及免疫学方法鉴定后,确认其所获得的细胞为PGCs细胞且状态良好。根据不同的转染试剂量与siRNA或shRNA载体量的配比,得出siRNA转染最优条件为siRNA﹕LipofectamineTM 2000=50 pmol﹕2 μL; shRNA转染最优条件为shRNA﹕X-Treme GENE HP DNA Transfection Reagent=500 ng﹕1.5 μL。在以上最优转染条件下,将试验组siRNA和shRNA分别转染第二代PGCs细胞。发现在siRNA干涉组中,阴性siRNA组和空白组相比,Piwi基因表达量在24、48、72和144 h差异均不显著（P＞0.05）;而3个试验组siRNA与阴性对照组相比,在24、48和72 h的Piwi基因表达量均呈现显著下降（P＜0.05）,但在144 h时表达差异不显著（P＞0.05）。在shRNA干涉组中,空白组和阴性对照组相比,Piwi基因表达量在4个时间点上差异均不显著（P＞0.05）;而3个试验组与阴性对照组相比,Piwi基因表达量在4个时间点上均显著下降（P＜0.05）。与siRNA干涉试验组相比,shRNA 载体表现出更强及更长时间的稳定抑制Piwi基因的效果。【结论】siRNA与shRNA均能较好抑制目的基因的mRNA表达,不同干涉效果表明采用shRNA 载体具有更好及更长时间的抑制作用,这为RNAi技术在家禽生殖干细胞中的应用研究提供基础资料。  相似文献   

新疆伊犁地区中熟玉米杂交种高产稳产性分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

夏春兰  陈蓉 《杂粮作物》1999,19(5):25-27

用高稳系数（ＨＳＣ）法分析了１９９７～１９９８年新疆伊犁地区中熟玉米杂交种区域试验９个能试品种的高产稳产性，并进行了有关参数间的相关分析，结果表明ＨＳＣ法是分析玉米新杂交种高产稳产性的准确、简便的方法。  相似文献   

伊犁地膜玉米制种栽培技术     

陈蓉  班小丽  焦子伟 《新疆农业科技》2005,(Z1):22

1播前准备 1.1选地与整地选择地势平坦、土壤肥沃、排灌方便、保水保肥能力强、含盐碱轻的砂土、壤土和轻粘土,忌低洼易涝地、跑风地及水土流失严重地块,忌重茬、甜菜茬和油葵茬.用地要深秋翻25厘米以上,灌足底水,冬前机力刮地粗平,早春及时耙耱保墒.播前整地要达到齐、平、松、碎、净、墒六字标准.  相似文献   

马铃薯高产栽培技术     

陈蓉  张宝良 《农村科技》2008,(7):8-8

阿勒泰地区属高寒地区,无霜期短,昼夜温差较大。马铃薯栽培种是冷凉地区的主导产业,其栽培技术要点概括为：一优三增、一打三喷、一晚四深。  相似文献   

意杨速生丰产栽培技术     

杨和文  储亮  陈蓉 《上海农业科技》2005,(2):125-126

目前正是杨树蓬勃发展的大好时期，我县已把杨树产业列为农民增收、农业增效的重要途径，新一轮农业结构调整的主导产业之一。意杨是20世纪70年代我国从意大利引种的杨树品种，简称意杨，在本地区速生丰产性状已显见。为切实推进全县意杨产业的发展，全面实现意杨速生、丰产、高效，现将意杨速生丰产栽培技术报道如下。  相似文献   

伊犁河谷日光温室樱桃番茄栽培技术     

陈蓉  张冬梅  黄强 《农业科技通讯》2005,(2):12-13

樱桃番茄又名迷你番茄、微型番茄，是普通番茄的一个变种。樱桃番茄果实小，单果重10～20g，植株生长势强，结果多，果实形状有球形、枣形和洋梨形等，其果型大小整齐一致，红度足，糖度高，色泽鲜艳，不裂果，口味香甜鲜美，营养价值高，含有丰富的胡萝卜素和维生素C．成熟果实含糖量高达7％～10％．风味独特。在医疗保健上也有重要作用，  相似文献   

制约阿勒泰地区甜菜高产的因素及解决途径     

陈蓉  严宏 《农村科技》2003,(8):18-18

  相似文献   

紫叶小檗的扦插繁殖   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈蓉  王玉生 《中国花卉盆景》1994,(8)

紫叶小檗又叫红叶小檗,为小檗科小檗属落叶灌木,是日本小檗的变种或变型。其枝叶的颜色会随着四季阳光的强弱而有所变化:初春呈鲜红色,盛夏为紫红色,入秋又变成了血红色;而它的浆果成熟后也变为红色,经冬后始脱落,因此具有很高的观赏价值。近几年来全国各地普遍引种。  相似文献   

大港三厂地面注水管道腐蚀分析及预防措施     

蒋官澄  纪朝凤  项勇  陈蓉  宋友贵 《油气储运》2006,25(8):57-60

对大港油田采油三厂注水系统管道的腐蚀机理进行了室内试验研究,研究结果证实,高矿化度和高腐蚀性离子含量水是腐蚀注水管道的主要因素.在同等条件下对各注水管道的腐蚀程度进行了对比,结果表明,选择合适的管材,并向注水管道内加注适当的缓蚀剂,可以有效抑制注水管道的腐蚀速度.  相似文献   

大白菜三大病害的发生与防治技术     

王金海  古丽孜业  马瑞  陈蓉  胡新峰 《新疆农业科技》2006,(3):35-35

大白菜病毒病、霜霉病、软腐病,是严重影响大白菜产量和品质的三大病害。必须引起广大农民朋友的注意。通过多年的生产实践,总结出了三大病害的防治技术。1病毒病1.1症状病毒病俗称“孤丁病”、“抽疯病”。各生育期均可发病,一般在幼苗期发病。苗期发病,心叶呈明脉或叶脉失绿,  相似文献