LTR对J亚群禽白血病病毒感染的影响     

冯少珍  李娇  吴晓婵  曹伟胜  廖明 《中国兽医杂志》2012,48(3):3-6

为探讨LTR基因在骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J) NX0101致病中的作用,利用反向遗传将血管瘤病变型ALV-J HN06株中两端LTR元件替换至NX0101株的相应位置,拯救出重组病毒NX-HNLTR株.人工接种7日龄SPF雏鸡,分别检测NX0101株和NX-HNLTR株对鸡体的影响.感染鸡生长都较慢.感染NX0101株的鸡,胸腺指数和腔上囊指数明显比对照组低,脾脏指数与对照组相比波动较大,骨髓和脾脏在攻毒后3周可检测到病毒整合到基因组中,胸腺和腔上囊在攻毒后6周才检测到.感染NX-HNLTR株的鸡脾脏指数明显比对照组低,攻毒后2周可检测到病毒整合到脾脏基因组中,骨髓和胸腺分别在攻毒后3周和6周检测到.结果提示,LTR对NX0101株感染鸡的免疫器官有一定的影响.  相似文献   

禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR 检测方法研究     

杨素  廖秀云  廖明  沙才华  徐海聂  曹伟胜  陈伟生 《中国畜牧兽医》2012,39(3):165-171

将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针;利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒;经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性;具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5 h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法。  相似文献   

靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J 复制的研究     

李娇  冯少珍  黄武  吴晓婵  李育豪  曹伟胜  廖明 《中国畜牧兽医》2012,39(8):16-19

试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4~5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以10³ TCID₅₀接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%~63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%~45.41%。  相似文献   

血管瘤禽白血病病毒FJ0610株的分离与鉴定     

刘红波  冯少珍  史伟伟  梁艺瑜  王小芬  李育豪  廖明  辛朝安  曹伟胜 《黑龙江畜牧兽医》2012,(3):96-98,161

为了解禽白血病病毒在商品蛋鸡中的流行情况,试验采用病理剖检、聚合酶链式反应(PCR)以及间接免疫荧光试验(IFA)等方法对送检的疑似禽白血病病毒感染的商品蛋鸡进行了病毒分离与鉴定,并对分离株的致瘤相关基因gp85基因进行测序,与国内外各亚群禽白血病病毒进行对比。结果表明:分离、鉴定到1株J亚群血管瘤禽白血病病毒,命名为FJ0610;分离株gp85基因核苷酸序列同源性在11.5%～94.5%之间,其中与血管瘤禽白血病毒株ZH-08株同源性最高,而与E亚群毒株同源性最低;基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明FJ0610株的gp85序列与ZH-08株的亲缘关系最近。  相似文献   

六株传染性支气管炎病毒的生物学特性鉴定及遗传进化分析     

龚军  郑俏伟  王建华  杨凤  汪招雄  廖明  任涛 《动物医学进展》2012,33(4):36-40

从华南地区疑似传染性支气管炎的病料中,分离到6株传染性支气管炎病毒并对这些分离株进行鸡胚矮小化试验、新城疫病毒干扰试验、血凝特性试验、鸡胚气管环感染试验、S1基因的克隆测序与序列分析。结果表明,各分离株均对鸡胚有明显的致矮小化作用;对新城疫病毒有明显的干扰作用;无直接血凝性,经10g/L胰酶处理后,可凝集鸡的红细胞;对鸡胚气管环有明显的感染致病变作用;利用RT-PCR方法,成功扩增出分离株的S1基因,与参考株S1基因序列比对,其中1株(GD-09II)属于Mass型,剩下5株与LX4型亲缘关系较近。  相似文献   

种鸡禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗免疫程序的研究     

蔡弋  亓文宝  徐成刚  陈晓春  罗开键  肖智远  张桂红  廖明 《中国兽医杂志》2009,45(7)

本研究设计不同的免疫程序,用禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re-1+H9N2 Re-2株)免疫黄羽种鸡,通过对H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体滴度监测,探讨H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体消长规律及禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗的免疫程序.结果表明,用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡后,H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体的消长规律基本同步,其抗体滴度阶段性峰值出现在免疫后的第21~28天.根据试验结果,建议用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡的免疫程序设为:首免(14 d),0.3 mL/只;二免(56 d),0.5 mL/只;三免(119 d或开产前4周),0.5 mL/只.  相似文献   

血管瘤相关禽白血病病毒CD08株的分离与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

张小桃  赖汉漳  张贺楠  徐成刚  廖明  辛朝安  曹伟胜 《中国兽医杂志》2009,45(11)

通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA抗原检测以及聚合酶链式反应(PCR)等方法,从湖南常德某集约化养殖场的疑似禽白血病感染的蛋鸡中分离到1株血管瘤相关B亚群禽白血病病毒(ALV-B),命名为CD08.利用特异引物对分离株进行PCR检测和gp85扩增,将测序得到的gp85序列与国内外各亚群禽白血病病毒相同区域序列进行相似性分析,发现其核苷酸序列相似性在44.3%～92.9%之间,其中与属于ALV-B的MAV-2株相似性最高,而与美国ALV-J ADOL-7501株相似性最低.基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明:CD08株的gp85序列与MAV-2株的亲缘关系最近.  相似文献   

表达SIV H1亚型HA蛋白重组腺病毒的构建与生物学特性研究     

亓文宝  叶贺佳  张文炎  焦培荣  樊惠英  张桂红  廖明 《中国预防兽医学报》2009,31(5)

本研究对猪流感病毒A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)株(SIV-GD03株)的HA基因序列进行了遗传演化分析,结果表明SIV-GD03株与GenBank中登录的全部192株H1亚型SIV中的151株核苷酸序列相似性达到85%以上,表明该毒株具有作为疫苗候选株的分子特征.将SIV-GD03的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pAd-CMV5-IRES-GFP中,将得到的重组穿梭质粒pAd-H1-IRES-GFP电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组获得重组腺病毒质粒prAd-H1-IRES-GFP,该质粒线性化后转染AD-293细胞.包装出的重组腺病毒rAd-H1HA-GFP通过荧光显微镜观察、PCR和western blot鉴定,证明HA基因和GFP基因在重组腺病毒中得到高效表达,该毒株在AD-293细胞上连续传12代后表现出较好的整合稳定性及传代稳定性.  相似文献   

H7亚型禽流感病毒灭活疫苗的研制及其免疫效果研究     

史惠  廖明  罗开健  任涛  张桂红 《中国畜牧兽医》2009,36(4):154-156

以H7N3亚型禽流感病毒接种鸡胚,收取鸡胚液为抗原研制禽流感病毒灭活疫苗,并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验,结果表明,该灭活疫苗安全性好,对28日龄鸡的最佳免疫剂量为0.5 mL/只,抗体临界保护值为5log2,免疫后6周HI效价达到高峰值9.4log2,以后逐渐下降,第20周抗体仍能维持较高水平。此外,交叉免疫保护试验表明,同一亚型之间具有良好的免疫保护作用,而亚型间缺乏坚强的交叉保护作用。  相似文献   

表面展示鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建     

陈筱薇  樊惠英  林文耀  程晓亮  叶昱  陈春丽  廖明 《华南农业大学学报》2012,33(3):398-402

以鸡传染性支气管炎病毒M41毒株基因序列为模板,利用PCR方法扩增膜定位信号缺失的S1基因(dS1),将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将S1及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBacTMDual,得到重组质粒pFastBac-gp64-dS1.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组穿梭载体Bacmid-gp64-dS1,提取重组Bacmid质粒,以PCR验证其正确性.将阳性重组Bacmid质粒利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-dS1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以Sf9昆虫细胞膜表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白.  相似文献