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[目的]建立适合荷包猪RAPD-PCR反应的最佳反应体系。[方法]以荷包猪为试验材料,以MgCl2浓度、引物浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量及退火温度为影响因子,在保持其他影响因子一致的条件下,变化单一因子,筛选最优参数,研究各影响因子对RAPD-PCR反应的影响。[结果]最佳反应体系的总体积为20.0μl,MgCl2浓度为2.5μmol/L、引物浓度2.0μmol/L、dNTP浓度400.0μmol/L、模板DNA为100 ng/μl、TaqDNA聚合酶为1.0 U。PCR反应程序:94℃预变性2 min(94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,循环40次),72℃延伸5 min。此反应体系所扩增出来的结果比较稳定,带型清晰且亮度适中。[结论]该研究为应用RAPD技术对荷包猪作进一步的遗传分析奠定了基础。 相似文献
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补体调节因子H(Complement factor H,CFH)为一类重要的补体调节蛋白，在调节补体激活反应和抵御病原感染过程中发挥重要作用。为研究黄河鲤（Cyprinus carpio YR）CFH基因在病原感染中的作用，本文克隆获得了体质量（20±2）g黄河鲤CFH基因开放阅读框序列（命名为CcCFH），进行生物信息学分析后，用荧光定量PCR(RT-PCR)技术分析其在肝脏、脾脏、头肾、鳃、心脏、皮肤、肠和体肾等组织中的表达水平以及腹腔注射100μL浓度为0.2 mg/mL的LPS溶液、100μL浓度为0.2 mg/mL的Poly I:C溶液和100μL生理盐水（对照组）后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h脾脏、头肾和体肾等组织的表达变化。结果显示：CcCFH基因开放阅读框全长2 817 bp，编码939个氨基酸，包含一个信号肽和15个CCP重复结构域。同源性比对和系统进化分析显示：CcCFH基因与鲤科鱼类相似性最高。组织分布结果表明：CcCFH基因广泛分布在健康黄河鲤各组织器官中，在肝脏和皮肤中表达量最高。LPS和Poly I:C刺激后，CcCFH基因在脾脏中... 相似文献