重组鸡β-防御素5 - β-防御素10双分子蛋白的构建及其理化特性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

马得莹  刘胜旺  韩宗玺  单安山 《农业生物技术学报》2009,17(1):41-46

鸡抗菌肽属禽β-防御素（AvBD）类,是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBD10基因定向插入到AvBD5-pGEX SalⅠ和NotⅠ双酶切位点上,构建了AvBD5-pGEX- AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌 (Escherichia coli ) BL21,于37 ℃不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测外源基因的表达。结果表明,重组AvBD5-AvBD10双分子融合蛋白的分子量约为36 kD,重组双分子蛋白占菌体总蛋白的35%,重组菌表达产物以包涵体形式存在。重组双分子蛋白经纯化后,分别以对数生长中期的大肠杆菌[BL21(DE3-) 株]与致病性链球菌［Streptococcus（CAB株）］为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组双分子蛋白的抗菌活性,结果表明,重组双分子蛋白对这两种细菌都具有抗菌活性。并且对温度和pH有很高的稳定性,在-70～100 ℃或pH 3～12处理30 min仍具有抗菌活性。  相似文献   

鸡γ-干扰素基因(ChIFN-γ)的瞬时表达及其抗病毒活性检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

殷喆  张文龙  陈伟业  刘胜旺  步志高  王君伟  吴东来 《农业生物技术学报》2009,17(6)

采用PCR技术从质粒pET-ChIFN-γ中扩增得到鸡(Gallus gallus)γ-干扰素(chicken interferon gamma,ChIFN-γ)基因,将其亚克隆到真核表达载体pCAGGS中.将鉴定正确的克隆命名为pCAGGS-ChIFN-γ,体外转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,24 h后经间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)检测,表达蛋白具有良好的免疫原性.然后利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水疱口炎病毒(VSV*GFP)在CEF细胞上检测表达的ChIFN-γ抗病毒活性(AVA),经检测其抗病毒活性为2×10~3AU/mL,并且其活性可被抗鸡IFN-γ的多克隆抗体阻断.  相似文献   

新城疫病毒感染鸡肾脏组织蛋白质组学方法条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

于德民  韩宗玺  邵昱浩  刘晓丽  孔宪刚  刘胜旺 《中国预防兽医学报》2012,34(5):360-364

为研究新城疫病毒(NDV)与宿主组织细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV疫苗(La Sota)接种的鸡肾脏组织为材料,对其差异蛋白的表达进行分析,通过条件的优化,建立了NDV感染鸡肾脏组织的双向凝胶电泳检测方法。采用ImageMaster2D Platinum version 6.0软件对电泳图谱分析后显示:24 cm IPG胶条(pH4～pH7)对应的凝胶中可检测到约1 400个蛋白点,蛋白点匹配率达90%,表明NDV感染鸡肾脏组织蛋白质组双向凝胶电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,在对4个时间点对照和人工感染凝胶分析过程中发现差异蛋白点主要集中于接种后7 d,该样品的2-DE电泳图谱中共有29个差异表达明显的蛋白点,其中上调表达蛋白点有15个,下调表达蛋白点有14个,利用荧光定量PCR对其中4个差异蛋白在mRNA水平进行检测,结果与双向电泳结果一致,NDV接种鸡肾脏组织蛋白质组学方法的建立为NDV致病机理的研究提供有效的方法。  相似文献   

禽滑液囊支原体研究进展     

曹中赞  栾新红  刘胜旺  何剑斌 《动物医学进展》2012,(11):113-117

滑液囊支原体是重要的家禽病原之一,能引起家禽上呼吸道疾病、传染性滑膜炎和黏液囊炎的发生,降低产蛋量、蛋品质以及孵化率,导致生长迟缓和饲料转化率降低,屠体废弃率升高,给全球家禽工业带来严重的经济损失。论文就目前滑液囊支原体的流行情况、致病机制、诊断方法以及防控措施等方面进行了概述,以期更好地检测、诊断、净化和防控禽滑液囊支原体病。  相似文献   

新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析     

吴寒光  孙军峰  梁雨萌  刘胜旺  李海 《畜牧兽医学报》2020,51(4):794-800

本研究旨在明确新城疫病毒（NDV）溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒LJS09株致病性的研究     

蒋露  李慧昕  韩宗玺  孔宪刚  刘胜旺 《中国预防兽医学报》2015,(3):181-184

为鉴定鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株(于2009年分离自江苏省)的致病性,本研究将ILTV LJS09以102 EID50的剂量人工感染SPF鸡。结果表明在感染后4 d~6 d(dpi),感染鸡表现出呼吸困难等临床症状;剖检时可见明显的喉气管病变及典型的组织病理学变化;临床指数达到1.4;发病率和死亡率分别为80%和10%;感染鸡血清抗体水平于8 dpi开始转为阳性(30%),20 dpi血清抗体全部转阳(100%)。另外,荧光定量PCR检测结果表明ILTV在感染鸡体内分布广泛,主要嗜性组织为喉头、气管、哈德氏腺、脑、盲肠和腺胃。根据感染鸡的临床指数、发病率和死亡率,表明ILTV LJS09株对鸡具有较强的致病性。  相似文献   

表达鸡Ⅱ型干扰素重组鸡痘病毒的构建及其特性分析     

孙永科  王云峰  智海东  刘胜旺  王玫  童光志 《农业生物技术学报》2005,13(1):81-85

将鸡Ⅱ型干扰素(ChIFNγ)基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681-ChIFNγ。将pSY681-ChIFNγ转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组，产生表达ChIFNγ的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγ。在含有X-ga1的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选，通过PCR和间接免疫荧光等实验证实获得纯化的、表达ChIFNγ的重组鸡痘病毒。将在鸡胚成纤维细胞中培养72h的rFPV-ChIFNγ上清接种小鼠成纤维细胞(L929)，通过细胞病变抑制实验证明重组ChIFNγ具有抑制水疱性口炎病毒复制的活性，培养上清的抗病毒效价为2048U／mL。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的研究进展   总被引：8，自引：1，他引：7  

贺秀媛孔宪刚  刘胜旺王建华 刘丽玲 《动物科学与动物医学》2001,18(2):36-38

  相似文献   

马传染性贫血驴强毒gp90基因的克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘永刚  张宝山  孔宪刚  杨威  刘胜旺  贾永清 《中国预防兽医学报》2003,25(4):244-248

以EIAV驴强毒株D-AmRNA为模板，利用RT-PCR技术，扩增了约1．4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序。测序结果表明所扩增的1338个核苷酸片段含有完整的gp90基因全序列。核苷酸和氨基酸序列比较分析结果表明：D-A EIAV与国内分离株辽系强毒L株差异率仅有1．8％，而与国外毒株(克隆1369，WENVl7、WENVl6、PSPEIAVl9)核苷酸差异率在35．5％～37．2％之间；D-A株与国内分离株L株氨基酸水平差异率在2．9％，而与国外毒株氨基酸水平上的差异率在42．6％—46．0％；D-AEIAV有19个N-连接糖基化位点，L株、WENVl7和WENVl6是18个，克隆1369、WENVl6和WENVl7亲本毒株PSPEIAVl9是12个。  相似文献   

新城疫La Sota疫苗接种鸡T细胞亚类的观察     

刘胜旺  李一径  陈立君  孙明艳  杨艳艳  卢景良 《中国预防兽医学报》1997,(4)

采用流式细胞分检仪（ＦＡＣＳ）检测了人工接种新城疫ＬａＳｏｔａ疫苗后鸡胸腺、脾脏和外周血液中Ｔ淋巴细胞亚群的变化规律。实验表明，接种ＬａＳｏｔａ疫苗后，鸡脾脏和外周血液中ＣＤ３＋和ＣＤ４＋Ｔ细胞数量明显增加，而ＣＤ８＋Ｔ细胞数量则减少，鸡胸腺中各亚群的变化不明显。提示在ＬａＳｏｔａ疫苗免疫后，各Ｔ细胞亚群具有重要而不同的功能  相似文献