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为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。 相似文献
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猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用 总被引:2,自引:1,他引:1
为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×10~2~1.29×10~9拷贝·μL~(-1)的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×10~2拷贝·μL~(-1),比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5%,呈良好的可重复性。用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06%(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06%(10/124)。上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段。 相似文献
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为研究补气血、补肝肾中草药复合添加剂的急性毒性,试验采用灌胃法,选取SPF级昆明小鼠40只,雌雄各半,随机均分为4组(对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组),以0.86 g/mL的中草药混悬液,每次0.4 mL/10 g灌胃,24 h内,高剂量组灌胃2次,每次0.4 mL;中剂量组灌胃2次,每次0.3 mL;对照组灌胃0.4 mL蒸馏水2次;低剂量组灌胃1次,0.2 mL。连续7 d,每天观察小鼠的精神状况和死亡情况。试验结束后,小鼠眼球采血,检测血液生理及生化指标;剖解小鼠,取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏称重,计算脏器指数,制作病理组织切片,观察各脏器病理变化。结果显示,试验期间各组小鼠未见异常;中、高剂量组小鼠体重极显著高于对照组(P<0.01);高剂量组肝脏指数、脾脏指数均极显著高于其他组(P<0.01);试验组小鼠白细胞总数较对照组极显著升高(P<0.01),但仍处在正常范围内;试验组小鼠血液肌酐显著降低(P<0.05),中剂量组尿素氮显著低于对照组(P<0.05);各组间其他生化指标均差异不显著(P>0.05);病理组织切片结果显示,各组肝脏、脾脏和肾脏均无任何病理变化。综上所述,中草药复合添加剂对蛋白质代谢有明显的促进作用,可提高机体免疫力和肾脏功能,其最大给药量(34.4 g/kg生药)是临床成人每天用药(0.371 g/kg)的92.7倍,证明该药物无毒性,安全性好。 相似文献
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吉木乃县大面积推广滴灌方式种植小麦,是小麦生产技术上的一项创新,是提高小麦产量、增加效益的重要技术措施之一。1品种选择吉木乃县滴灌春小麦宜选择新春10号、新春11号、新春29号等品种种植。2产量结构种植密度35~40万株/666.7m2,收获穗数38~40万穗/666.7m2,单穗重1.2g,千粒重45g以上,产量450kg/666.7m2以上。3地块准备选择中等以上土壤肥力,含盐碱量小的农田。 相似文献
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跟踪过程中发生的尺度变化、形变、遮挡是导致模型漂移的重要原因。为了克服模型漂移对鲁棒跟踪的影响,本文提出了一种利用多判别式模型和候选区域的跟踪算法。首先,该算法采用候选区域替代传统的滑动采样,适应跟踪过程中目标的位移和尺度变化。接下来,为了提高目标的表征能力,先用预训练网络提取整幅图片的深度特征,再通过感兴趣区域采样层(ROI pooling layer)快速提取每一个候选区域的深度特征,进一步提高跟踪算法的鲁棒性。最后,运用多模型选择机制进行回撤过去错误的模型更新,并通过调整搜索区域实现对目标的重检测,有效抑制了模型漂移对鲁棒跟踪的影响。实验中,本文算法与相关算法在OTB 2013数据库和UAV 20L数据库上进行了对比。结果表明,本文算法在精确度与成功率上均取得了最优性能,并能有效抑制模型漂移对鲁棒跟踪的影响。 相似文献
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香梨树喜光性强,顶端优势明显。干性强,易造成树冠外围结果(结果部位外移),内膛光秃,成花少,产量底,特别在幼树上更为突出[1]。香梨幼树枝条开张角度小,枝条生长旺盛,枝条不充实,不易形成花芽,早期结果晚,无效枝增多,随着校龄的增大,结果部位外移,易造成外围结果,枝冠内膛光秃,影响产量和品质,为此,我们对5年生香梨幼树进行了人工拉枝开张角度试验,通过试验,提高花芽枝量,达到早产、优质、高产目的,确定开角以60°~90°最适。1材料和方法调查地点设在阿克苏哈拉塔镇9大队二小队香梨园,调查树为5—7年生,生长一致… 相似文献
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我谨代表联合国粮农组织主任迪乌夫博士向在座的各位表示诚挚的问候,向中华人民共和国水利部和国际沙棘研究培训中心举办的国际沙棘研讨会表示热烈的祝贺!同时,对能参加这次盛会感到非常荣幸.据悉,这次研讨会将着重讨论沙棘所取得的科研和开发成果,以及21世纪沙棘的可持续发展及前景.它将为展示自1995年国际沙棘研讨会以来的沙棘开发最新成果,交流 相似文献
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在城市附近,目前有很多饲养头数在20~50头的小型奶牛场。如何利用自然条件,科学地进行管理,降低饲养成本,提高产出,取得良好的经济效益,通过对新发镇和朝阳乡3个奶牛场的调查和办场体会,认为应抓好以下几个环节。1饲养管理及畜舍环境卫生牛的饲喂主要包括草、料、水三个方面,如何抓好这三方面对一个牛场很重要。1.1奶牛是反刍动物,每天必须进食一定量的粗纤维食物才能反刍。城市附近的奶牛场夏季饲草主要是水稗草,秋冬春季以秸杆为主。不论是水稗草还是秸杆,喂前都要尽可能铡碎,一方面可以节约饲草,降低成本,另一方面有助于… 相似文献