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蕨类植物的DNA提取方法比较研究(摘要) 总被引:3,自引:0,他引:3
[目的]研究蕨类植物DNA提取的方法,为进一步的遗传多样性以及分类学的研究提供基础。[方法]通过改变试剂的用量以及操作方法对CTAB法提取DNA方法进行了改进。①取0.5~1.0 g新鲜叶片,加液氮充分研磨成粉末,置于1.5 ml离心管中,加2%CTAB600μl及10μl巯基乙醇;②65℃水浴15 min(期间取出振荡1次),冷却;③加500μl氯仿/异戊醇(24:1)上下颠倒数次至液相深绿色;④12 000 r/min离心3 min;⑤取上清液至-1.5 ml离心管,重复步骤③、④;⑥取上清液至-1.5 ml离心管中,管内预装1 ml 95%乙醇。室温静置2 h;⑦12 000 r/min离心3 min;⑧弃上清,用70%乙醇(约4400μl)洗涤沉淀,真空干燥器干燥。干燥后加低温保存;⑨使用时加100μl超纯水溶解。-25℃保存。提取出的DNA样品中加超纯水50μl,混匀后,用石英比色杯于DU(R)800分光光度计中测定紫外消光值,根据其在260nm和280 nm波长处的光吸收值计算DNA产率,根据A_(260)/A_(280)判断DNA样品的纯度。DNA样品的浓度(μg/μl)为:在260 nm的紫外消光值×核酸稀释倍数×50/1 000。纯DNA样品A_(260)/A_(280)紫外消光值应为1.8,A_(260)/A_(230)值应大于2.0。A_(260)/A_(280)值大于1.9时,表明有RNA污染,小于1.6时,表明样品中存在蛋白质或酚污染。A_(260)/A_(230)值小于2.0时表明溶液中有残存盐和小分子杂质,如核甘酸、氨基酸、酚等。分别对常规CTAB法和改进CTAB法提取出的蕨类植物DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测,以验证提取出DNA的质量。[结果]改进的CTAB法提取的蕨类DNA,其主带(基因组DNA)更加明亮,且与其他杂带区分明显,表明DNA的降解较少,DNA得率及纯度都有了很大提升。[结论]改良的CTAB提取法能够提取出高质量的蕨类植物DNA。 相似文献
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主要从设计手法与表现方式两方面入手,将旧工业建筑的改造归结为转换功能、重组空间及选择表现方式,并对这三个方面进行了简要阐述。 相似文献
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过滤器是整个微灌系统首部枢纽的核心设备,关系到整个系统的使用寿命.现详细阐述了微灌过滤器的常见种类及适用范围,并根据水质或水源条件等因素提出了适用类型,同时对微灌过滤器后期运行、维护提出了几点建议,以促进微灌技术在农业上的推广应用. 相似文献
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[目的]利用SRAP分子标记的方法对蕨类植物进行种属分类。[方法]以采集于重庆市缙云山的27种蕨类植物为研究对象,以其嫩叶为材料,用改良后的CTAB法提取蕨类植物的基因组DNA,用凝胶电泳和吸光值法对总DNA的质量进行检测,用SRAP分子标记技术对这27种蕨类植物进行了分类研究。[结果]27种蕨类植物的SRAP标记聚类分析图谱表明,卷柏科与里白科、木贼科与鳞毛蕨科、乌毛蕨科与鳞毛蕨科、铁角蕨科与蹄盖蕨科、鳞始蕨科与鳞毛蕨科的亲缘关系比较接近;试验结果与传统分类学中贯众属属于鳞毛蕨科有冲突。[结论]用SRAP分子标记的方法得到的结果与传统分类结果存在一定的差异,但这种差异很小,试验结果可以为重建蕨类植物的系统演化关系提供参考。 相似文献
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[目的]利用SRAP分子标记的方法对蕨类植物进行种属分类。[方法]以采集于重庆市缙云山的27种蕨类植物为研究对象,以其嫩叶为材料用改良后的CTAB法提取蕨类植物的基因组DNA,用凝胶电泳和吸光值法对总DNA的质量进行检测,用SRAP分子标记技术对这27种蕨类植物进行了分类研究。[结果]27种蕨类植物的SRAP标记聚类分析图谱表明,卷柏科与里白科、木贼科与鳞毛蕨科、乌毛蕨科与鳞毛蕨科、铁角蕨科与蹄盖蕨科、鳞始蕨科与鳞毛蕨科的亲缘关系比较接近;试验结果与传统分类学中贯众属属于鳞毛蕨科有冲突。[结论]用SRAP分子标记的方法得到的结果与传统分类结果存在一定的差异,但这种差异很小,试验结果可以为重建蕨类植物的系统演化关系提供参考。 相似文献
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