牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用     

韩猛立  蔡日鹏  黄新  何延华  薄新文  钟发刚 《中国兽医学报》2011,31(4)

根据GenBank中牛Th1/Th2(BoTNF-α、BoIFN-γ、BoIL-2、BoIL-4、BoIL-6、BoIL-8、BoIL-10)型细胞因子的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将Th1/Th2型细胞因子基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。对建立的Th1/Th2型细胞因子SYBR-GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法进行分析,结果表明牛IFN-α、IFN-β、IFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明产物为特异的单峰,具有较高的灵敏性和特异性,重复性较好。建立了检测Th1/Th2型细胞因子的实时荧光定量RT-PCR方法,为在mR-NA水平对牛Th1/Th2型细胞因子的定量分析奠定了基础。  相似文献   

树干茎流研究方法及其述评   总被引：14，自引：2，他引：14  

周择福  张光灿刘霞薄金燕  李小磊 《水土保持学报》2004,18(3):137-140,145

树干茎流研究是国内外森林水文学研究中的重要内容,对国内外树干茎流的研究方法及研究成果进行综述,并将树干茎流研究方法分为野外实测法和数学模型估测法,分别进行了系统分类和简要述评。树干茎流的野外实测法有观测标准株的选取与树干茎流水的收集两个关键技术环节。树干茎流的数学模型分为3种类型,即经验模型、概念模型、理论模型。经验模型反映的是树干茎流量(或茎流流率)与降雨量的定量关系,概念模型描述的是茎流量与降雨特征及林分特征因子的数量关系,理论模型刻画了树干茎流形成的机理和动态变化过程(树干茎流随降雨的时空变化规律),分别给出了各类模型主要的数学表达式,并分析了各类模型主要的优点和缺点。  相似文献   

昆虫数字图像的分割技术研究   总被引：17，自引：4，他引：17  

于新文  沈佐锐 《农业工程学报》2001,17(3):137-141

以棉铃虫为例，利用数字图像技术对昆虫图像的分割技术进行了研究。主要介绍了简单直方图分割算法、最佳熵阈值分割算法、模糊集合熵阈值分割算法以及极小误差法阈值分割算法。结果表明，简单直方图分割算法和模糊集合熵阈值分割算法能够获得较好的分割结果，其中模糊集合熵阈值分割算法获得的分割结果更符合实际需要。而最佳熵阈值分割结果因为包含了太多的背景像素而最不符合实际需要，极小误差阈值分割结果则难以反映出棉铃虫鳞翅上的斑纹特征，不符合进一步特征提取的要求。  相似文献   

扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin部分片段克隆及不同体节mRNA转录水平分析     

叶倩  马勋  薄新文  王正荣  张艳艳 《西北农业学报》2015,24(8):16-22

旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异,最终克隆获得749bp的serpin基因片段。进化分析表明,扩展莫尼茨绦虫serpin基因与多方棘球蚴serpin基因有较近的亲缘关系。标准曲线分析显示,serpin和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。同时试验结果显示,serpin基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。由此初步推测,此基因可能在扩展莫尼茨绦虫虫卵发育为六钩蚴的过程中发挥一定作用。  相似文献   

基于SFLA和LSSVM的芹菜总黄酮含量的预测模型     

曾燕  成新文  王晓  陈欲云 《湖北农业科学》2015,54(6)

利用混合蛙跳算法(SFLA)对最小二乘支持向量机(LSSVM)的参数进行优化,建立了一种基于混合蛙跳算法和最小二乘支持向量机的芹菜总黄酮提取预测模型。仿真结果表明,该预测模型提高了预测精度,性能更加稳定,为芹菜总黄酮提取的在线预估和优化控制提供了可靠的技术参考。  相似文献   

张家川县应用防啃剂防治林木鼠兔害试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘珍贵  杨克明  陈金海  窦明明  邵新文  马小兰 《甘肃林业科技》2006,31(2):68-69

张家川县在退耕还林区应用多功能新型防啃剂对林木鼠、兔害进行了喷涂防治试验,结果表明:林木喷涂后防治效果显著,并对人畜无毒无害。  相似文献   

重合器加跌落式分段器模式     

孙慧灵赵新文  张立群 《农村电气化》2006,(2):12-14

该文简要论述了重合器、分段器。为当今农村电网配电馈线自动化的基本模式,并就重合器、分段器对故障的判断和隔离过程和运行中的应注意事项做了介绍。  相似文献   

海莲耐盐基因AOC克隆及转录融合表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

段瑞军  郭建春  胡新文  刘国道  符少萍 《热带作物学报》2006,27(3):56-60

利用RT-PCR的方法从红树林海莲中克隆丙二烯环化氧化酶基因(AOC),并进行序列测定和BLAST程序进行同源序列分析。从RT-PCR得到的产物,其核苷酸序列与GeneBank中海莲丙二烯环化氧化酶基因AO(CBAB21610)的核苷酸序列完全相同。AOC基因通过中间载体pBS-AOC,pJIT60-AOC,最后克隆到植物表达载体pGreenII0229上,得到双35S的pGreenII0229-AOC植物表达载体。AOC基因和ipt基因通过中间载体pBS-AOC,pBS-ipt,pBS-AOC-ipt,pJIT60-AOC-ipt;最后将AOC和ipt基因以转录融合的方式克隆到植物表达载体pGreenII0229上,得到具有双35S启动子的AOC,ipt双基因转录融合的植物表达载体pGreenII0229-AOC-ipt。  相似文献   

梅亚早得利486西瓜新品种的选育     

吉新文  马琳等 《中国西瓜甜瓜》2003,(1):11-12

梅亚早得利486是梅业种业有限公司选育的早熟、优质、果皮韧性较强的杂交一代西瓜新品种。植株长势中庸，耐湿，低温弱光下有良好的坐果性，雌花多，易坐果，膨瓜快，抗逆性强；第1雌花着生于主蔓4－5节，以后隔4－5节再现雌花；抗炭疽病，较抗枯萎病；果实圆形，果皮绿底色覆墨绿色条带，成熟时果面蜡质白粉明显，商品外观类似京欣1号；果皮厚1．0－1．1cm，具良好的抗裂性，耐长途运输；红沙瓤，瓤质细，爽甜可口，中心可溶性固形物含量11．8％，中边糖梯度小；丰产性好，单瓜重6kg，产量4000－4500kg/667m^2。2002年通过山西省农作物品种审定委员会审定。  相似文献   

绵羊生长激素(oGH)的分子克隆与序列测定   总被引：6，自引：0，他引：6  

刘守仁  王新华  钟发刚  沈敏  杨华  连宏军  薄新文 《中国兽药杂志》2003,37(6):8-10

本文旨在新疆绵羊生长激素(oGH)基因的克隆。从阿勒泰×中国美利奴杂交羊脑垂体细胞中提取总RNA,分离得到具翻译活性的mRNA。用RTPCR方法扩增出编码oGH的基因,长度为671bp。将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,回收纯化。采用PCR克隆试剂盒将扩增产物连接至pTAdv质粒上,经PstI和XbaI双酶切鉴定正反插入后,筛选正向插入阳性克隆,并进行序列分析。结果表明克隆到的oGH基因序列与国外报道的序列有4个碱基差异,但所推导的氨基酸序列完全一致。oGH基因的开放阅读框架共含654个核苷酸,编码217个氨基酸,其中信号肽26个氨基酸,编码碱基为1～78(78bp);成熟肽191个氨基酸,编码碱基为79～651(573bp);终止密码子TAG(652～654bp)。其蛋白质的氨基酸序列与牛、人和鱼的序列同源性分别为99.08%、26.7%和5.9%。  相似文献