鸭源鸡杆菌双重PCR检测方法的初步建立     

皇甫和平  杨霞  赵军  王川庆  陈陆  常洪涛  王新卫  刘红英  姚慧霞 《中国预防兽医学报》2013,35(8)

为建立鸭源鸡杆菌(G.anatis)双重PCR检测方法,并对鸡杆菌分离株进行种类鉴定,本研究根据GenBank中G.anatis12656-12株的gtxA基因序列设计一对PCR引物,合成扩增rpoB基因的引物作为内参基因,建立了G.anatis双重PCR检测方法.检测结果显示:以G.anatis Yu-PDS-RZ-1-SLG株DNA为模板进行的双重PCR检测能够扩增出两条目的片段;其它16株细菌包括副鸡禽杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、福氏志贺菌和奇异变形杆菌均只扩增出了一条目的片段;该方法可以检测到浓度为6.5×102 cfu/mL的G.anatis;34株鸡杆菌分离株均扩增出了两条预期大小的目的片段.此外,序列分析结果表明,10株鸡杆菌河南分离株的rpoB基因序列与鸭源鸡杆菌种参考株(CCUG15563)的同源性最高(97.5％～99.0％),属于鸭源鸡杆菌种.本研究建立的G.anatis双重PCR检测方法,可用于含gtxA基因鸡杆菌菌株的鉴定及临床病原学诊断.  相似文献   

新生仔猪急性腹泻疫情中5种病毒感染的分子检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

常洪涛  杜季梅  陈陆  赵军  郭占达  王川庆 《饲料工业》2013,(11):61-64

为查明河南省新生仔猪急性腹泻疫情的主要病因,研究分别应用RT-PCR和PCR方法对98个猪场送检的181份发病仔猪病料进行了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(GARV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的分子检测。结果显示,PEDV阳性检出率高达71.27%,与TGEV、GARV、CSFV和PRV的混合感染阳性检出率分别为2.76%、2.21%、56.91%和17.13%,与CSFV、PRV的三重混合感染阳性检出率为17.10%,而与TGEV、GARV的三重混合感染阳性检出率仅为0.55%;TGEV、GARV、CSFV和PRV的阳性检出率分别为5.52%、2.21%、69.06%和44.20%,CSFV和PRV的混合感染阳性检出率为32.04%;腹泻病原检测阳性猪场在河南省分布较为均匀,秋、冬季节比例较多,但春、夏季季节呈逐步上升趋势;规模化猪场阳性场所占比例远高于中小型猪场。研究结果证实新生仔猪急性腹泻疫情在河南全省猪场感染和流行极为普遍;季节性已日趋不明显;PEDV是引起此次疫情的最主要病因,但CSFV和PRV扮演着推波助澜的重要角色。  相似文献   

雏鸡肠组织中CD44的鉴定及时空表达特性     

吕文强  师润  陈陆  张金来  杨霞  赵军  王新卫  王川庆 《中国兽医学报》2013,33(1):53-58,63

为了解CD44分子在雏鸡肠组织内的表达及其时空表达特性,设计1对引物,建立RT-PCR方法对CD44mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡CD44基因表达水平的SYBR Green Ⅰ实对荧光定量(Q-PCR)方法,对1～28日龄商品鸡肠组织不同部位中CD44 mRNA表达水平进行检测.结果显示,从鸡肠组织中成功鉴定出CD44 mRNA,建立的荧光定量方法能特异性检测到CD44 mRNA,CD44和GAPDH基因的扩增效率分别为95％和101％,线性范围均在108～104拷贝/μL,敏感度高,最低检测限分别为45和77个拷贝.建立的CD44SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点.雏鸡不同日龄,不同肠组织中CD44表达水平有所差异,5～20日龄时的空肠组织和5～10日龄时的直肠组织中CD44表达量较高.  相似文献   

乙型脑炎病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究     

王帅涛  王新卫  陈陆  赵军  常洪涛  杨霞  刘红英  王川庆 《中国兽医学报》2013,33(6)

根据乙型脑炎病毒(JEV)NS3基因保守序列设计并合成一对引物,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测JEV的SYBR Green I荧光定量PCR方法.该方法在1.92×108～1.92×101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中19拷贝/μL的病毒核酸,敏感性是常规RT-PCR方法的10倍;检测时间缩短了50％,该方法不与其它猪源病毒发生交叉反应;在重复性试验中,批间、批内变异系数均小于1.2％.应用本方法对JEV在BHK-21细胞上繁殖滴度进行定量检测,绘制JEV在BHK-21细胞上的一步生长曲线,并与TCID50方法绘制的复制动态曲线进行比较.结果显示,两种方法测定的JEV在BHK-21细胞上的复制动态具有一定的平行关系,对于制备灭活疫苗而言,荧光定量PCR方法更快速和敏感,所测得的抗原含量更精确,有利于企业机动灵活地安排生产.  相似文献   

拖拉机自动驾驶液压转向系统中集成阀的设计     

赵琳苑  赵军 《农机使用与维修》2019,(3):4-6

在拖拉机自动驾驶液压转向系统中,经常会使用到多种液压控制回路,通常是通过压力、流量、方向等单个或多个液压控制阀来实现回路功能。将所有液压元件逐个联接起来,中间需要多处过渡管路、连接阀块和连接密封,整个回路系统会很庞大,存在密集管道,安装复杂和维护操作困难以及出现许多泄漏位置等缺陷。在当前的设计中,越来越注重液压元件的集成使用。在文中将对一款新型拖拉机自动驾驶液压转向系统中的部分液压阀进行集成设计。  相似文献   

2F-12型变量施肥试验台试验     

初金哲  庄卫东  衣淑娟  王熙  赵军 《农机化研究》2019,(1):185-189

为了提高化肥的利用率,达到提高产量减少污染的目的,以黑龙江垦区施肥机械为基础,设计了一台2F-1 2型变量施肥试验台。变量施肥试验台的目的是研究降低施肥成本的方法和途径,提高农业生产的经济效益和环境效益,简化施肥操作步骤,降低劳动强度,在提高变量施肥控制系统的开发设计能力的同时,为田间变量施肥机具的大面积推广提供技术储备。2F-12型变量施肥试验台可以完成变量施肥软件的测试和变量施肥的监测工作,主要由箱体、排肥装置、液压系统、电控系统、车载计算机,以及施肥监测系统组成。测试试验结果表明:变量施肥软件无误,施肥口输出肥料正常,机具设计结构合理,可为黑龙江垦区变量施肥作业提供技术支持。  相似文献   

醇用型甜高粱丰产性及适应性评价     

赵军  杨珍  王凯  刘辉生  罗新华 《甘肃农业科技》2019,(2):40-45

在甘肃省武威市古浪县、民勤县和凉州区采用单因素随机区组对引进的11个醇用甜高粱品种(系)进行多点品比试验,比较分析了各品种的丰产性、稳定性、适应性、糖锤度、糖产量等。结果表明,参试品种在3个试验点丰产性最好的是克沃5号,折合产量114 989.85 kg/hm~2,属高产、稳产型品种,适宜在古浪和民勤县地域种植;其次是SF83003,折合产量103 192.50 kg/hm~2,属于高产、稳产型品种,适宜在凉州区、民勤县和古浪县种植;第3的是N32F2026,折合产量103 130.85 kg/hm~2,属于高产、稳产型品种,适宜在凉州区和古浪县地域种植。综合考虑各参试品种(系)的丰产性、稳产性、适应性、糖锤度、糖产量及田间综合表现等,在武威市表现较好的4个品种(系)依次是克沃5号、SF83003、N32F2026、辽甜3号,建议在武威市凉州区、民勤县、古浪县示范推广种植。  相似文献   

滴施19%溴氰虫酰胺防治辣椒田棉铃虫试验     

程萍  王映山  赵军 《农村科技》2019,(3)

棉铃虫是辣椒田间主要害虫,发生时期长,防治难度大。为更好地防治辣椒田间棉铃虫,特选用19%溴氰虫酰胺悬浮剂进行田间滴灌试验,于第2代棉铃虫发生前期,随滴水667米2滴施19%溴氰虫酰胺悬浮剂35～70毫升,调查棉铃虫防治效果。结果表明:667米2滴施19%溴氰虫酰胺悬浮剂50毫升,药后21天,防效达75.6%,取得了良好的防治效果。  相似文献   

A型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用     

杨钰楚  王晨曦  周雪珂  赵军  徐志文  朱玲 《江苏农业学报》2019,35(4)

为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法。利用建立的RT-LAMP检测方法对口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒与塞内卡病毒进行特异性试验。将SVA VP1质粒10倍梯度稀释液作为模板(1×10~0～1×10~7拷贝)进行RT-LAMP和RT-PCR反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性。采集疑似发病猪的鼻腔拭子和水疱液共126份样品,应用RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化鉴定。结果表明,与传统RT-PCR相比,RT-LAMP检测方法灵敏度高1 000倍,且与其他病毒无交叉反应,具有高度敏感性和特异性。临床样品检测结果显示,鼻腔拭子样本SVA阳性率为29.6%,水疱液样本SVA阳性率为100.0%,2种方法检测结果一致,符合率为100%。综上所述,本研究建立的RT-LAMP检测方法准确、简便、经济有效,尤其适用于现场和基层实验室对SVA的快速诊断。  相似文献   

育苗伴侣在机械育秧中培育壮秧研究试验     

万春燕  赵军  刘思华  丁怀玲  刘春军 《农业科技通讯》2019,(10)

本试验采用荃优丝苗作为供试品种,研究育苗伴侣、旱育保姆在机械插秧中的运用,结果表明其运用可以较好的控长、优化根系生长,使得分蘖增强,提高了秧苗素质,能更好的适应机插秧作业。  相似文献