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为了能准确、快速的检测nsp2基因缺失的猪繁殖与呼吸系统综合征变异病毒(PRRSV),在nsp2基因核苷酸序列上设计了一条上游引物(nsp2-1)和两条下游引物(nsp2-2,nsp2-3),其中一条下游引物(nsp2-2)设计在缺失碱基序列区域。通过条件优化建立了区分经典株和高致病性nsp2基因缺失株的PCR方法;并将最优化条件运用于SYBR Green荧光定量PCR实验,建立了根据融解曲线鉴别nsp2缺失变异株的荧光定量PCR方法,可检出3～6个基因拷贝。 相似文献
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TyrR是大肠埃希氏菌(Escherichia coli简称E.coli)芳香族氨基酸生物合成和运输途径中的一种全局性调控蛋白,控制着包括tyrP在内的8个转录单元的转录。将tyrP基因启动子的两个RNAP(RNA聚合酶)结合位点进行定点突变来影响TyrR对tyrP的介导活化,并且TyrR与L-苯丙氨酸(L-Phe)结合极大地增强了RNAP对下游结合位点(tyrP启动子)的结合亲和力,因此可用L-Phe来调控启动子强度进而调控转录水平。本文以构建L-Phe高产菌株为最终目的,对tyrP启动子进行突变并用以构建L-Phe生物传感器,使tyrP启动子强度转变为可测量的荧光值,再使用L-Phe调控该传感器,影响tyrP启动子强度。最终发现突变后的tyrP启动子强度发生不同程度的改变,并且用L-Phe调控后,在一定浓度范围内,随着L-Phe浓度的升高tyrP启动子强度也在一定范围内增强。这将有利于筛选出受调控的优质启动子,并为改造E.coli代谢路径及高产L-Phe菌株构建有重要意义。 相似文献
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