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为建立1型鸭甲肝病毒(duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1)和鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)抗体的液相芯片检测方法,应用RT-PCR从鸭尿囊液中扩增获得714bp的DHAV-1VP1序列和1 503bp的DTMUV-E序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅲ和pET-28a(+)并进行表达。通过SDS-PAGE验证DHAV-1-VP1和DTMUV-E蛋白能够有效表达,通过Western blot进一步验证表达的蛋白均可与其对应的阳性血清发生反应。根据xMAP液相芯片技术原理,以表达的重组蛋白为抗原分别与不同编号的微球偶联,获得偶联复合体作为捕获载体,建立DHAV-1和DTMUV抗体单一和双重液相蛋白芯片检测方法。结果表明,DHAV-1和DTMUV的临界值分别为190.30和223.29,灵敏性检测2种阳性血清的抗体水平分别为1∶51 200和1∶6 400,重复性验证批内和批间变异系数分别为1.44%和3.94%,为DHAV-1和DTMUV抗体监测提供了高通量、重复性好、特异性高的抗体检测体系。  相似文献   
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通过对两组试验数据的分析,确定苯磺隆对甘蓝型胞质不育系8963A在杂交油菜制种中辅助化学杀雄的最佳喷药时期是最大花蕾平均直径2.5 mm(平顶期),最佳喷药剂量是浓度为0.094μg/ml的药液每亩地16kg。最佳喷药时期搭配最佳喷药剂量可以获得较高的制种产量和质量,该试验结果对低温敏感型细胞质雄性不育三系杂交制种具有重要的应用价值。  相似文献   
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为建立兔出血症病毒(RHDV)的血清学检测方法,本实验通过生物信息学分析,将RHDV衣壳蛋白VP60的3个区域VP60-1(aa2-aa208)、VP60-2(aa174-aa425)和VP60-3(aa342-aa579)分别进行原核表达,获得了大小为42 ku、47.5 ku和45.6 ku的重组蛋白。经ELISA和western blot试验分析显示3种重组蛋白均能够被RHDV阳性血清识别,但VP60-1较VP60-2和VP60-3具有更好的反应原性,因此以表达的重组蛋白VP60-1作为包被抗原建立了RHDV间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,对不同免疫期兔血清的检测结果与HI呈显著相关性。对临床样品的检测结果表明该ELISA方法比HI试验更敏感。本研究以VP60-1为包被抗原建立的ELISA方法可以用于RHDV疫苗的免疫评估。  相似文献   
5.
结合山东农业大学动物科学与动物医学实验教学中心创新实践实验室的建设情况,探讨本科创新实践实验室对学生创新实践能力培养的作用。从建立的必要性、人才的选拔、硬件条件保障、培养模式、建章立制等方面详细介绍了创新实践实验室建设及开放共享的情况,为创新实践型新农科人才培养提供经验。  相似文献   
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