山羊PTHrP基因CDs区克隆及其融合蛋白的表达     

杨振宇  郑惠玲  邢瑞芳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,38(10):45-50

【目的】克隆山羊甲状旁腺相关肽(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)基因,并进行原核表达,获得具有生物学活性的融合蛋白。【方法】无菌采集山羊乳腺组织,采用TRIZOL法提取总RNA,RT-PCR克隆山羊PTHrP基因全CDs区。将山羊PTHrP基因全CDs区插入pET-32a(+)表达质粒构建pET-PTHrP质粒,经酶切和测序鉴定后,将其转化E.coliBL21(DE3)菌株,经2mmol/LIPTG、37℃诱导表达8h后,进行SDS-PAGE和Westernblotting分析。【结果】获得了山羊PTHrP基因全CDs区,长534bp(GenBank登录号GU573787);酶切和测序显示,原核表达载体pET-PTHrP构建成功;SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,在E.coliBL21(DE3)中成功诱导表达了pET-PTHrP融合蛋白。【结论】克隆了山羊PTHrP基因,获得了PTHrP融合蛋白。  相似文献   

山羊PTHrP基因的多克隆抗体制备和组织表达图谱分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑惠玲  杨振宇  祝珍珍  安俊辉  邢瑞芳 《畜牧兽医学报》2011,42(2)

旨在获得山羊PTHrP多克隆抗体,检测其在山羊各组织中的表达图谱,以便进一步研究山羊PTHrP的功能。本研究构建山羊PTHrP基因的原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达获得融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后多点免疫大耳白兔,制备多克隆抗体,最后使用West-ern blot检测PTHrP在山羊各组织中的表达。结果,酶切和测序显示原核表达载体构建成功;SDS-PAGE电泳结果说明融合蛋白(约36.5 ku)被成功纯化;间接ELISA检测所制备的抗体效价达1∶51 200;表达谱显示PTHrP在山羊乳腺、肾脏、垂体、脑、心脏、肝脏、骨、肌肉、脾脏等组织中均有表达。本研究成功制备了山羊PTHrP的多克隆抗体,发现PTHrP在山羊各组织中广泛表达。  相似文献   

广藿香栽培技术要点     

邢瑞芳 《新农村》2007,(7):14-14

广霍香是用量大、经济效益高的中药,凡野生攀枝花能正常开花结果的地方都可栽培。广霍香靠扦条繁殖,要选灌水方便的地方作苗床。插苗宜在9月至10月上旬进行。苗床要深耕细耙,以土杂肥作底肥,筑120厘米宽的高畦。而后选粗壮、节间短密的顶梢作插条,长12～15厘米,剪去下部叶,留顶  相似文献