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甜菜DAMD-PCR体系的建立及优化 总被引：2，自引：2，他引：0
为了建立甜菜DAMD扩增体系,以期利用DAMD引物应用于甜菜品种指纹图谱的构建及分子标记辅助育种。本实验利用单因素变量的方法对甜菜DAMD体系进行优化。同时选用12个甜菜品种,利用优化的体系对25条DAMD引物进行扩增。获得甜菜的最适DAMD体系:总体积为20μL,包含模板DNA 10~80 ng、0.75 U的DNA聚合酶、0.2μL的d NTPs(2.5 mmol/L each)以及2.0μL的引物(10μmol/L)。同时25条引物均扩增出了清晰条带,除了个别引物多态性较差外,其余引物多态性都非常的丰富,其中引物62H(-)就可以把实验中用到的12个甜菜品种全部区分开。由此可见,DAMD引物的扩增效率很高,并且扩增结果稳定,条带清晰,非常适合甜菜品种指纹图谱的构建及遗传多样性分析。 相似文献
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为了筛选适宜于甜菜品种纯度鉴定的DAMD引物,笔者利用12 个不同的甜菜品种分别对26 条DAMD引物进行扩增,并分别采用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳和2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。结果表明,从26 条DAMD引物中筛选出16 条扩增清晰的引物,这16 条引物共扩增出139 条带,其中多态性条带为122 条,多态性百分比为87.7%,这16 条引物可以作为甜菜品种纯度和真实性鉴定的核心引物,同时发现聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的检测结果差异不大,而琼脂糖凝胶具有制作方便、检测简单以及不使用任何有毒药剂等优点,推荐甜菜DAMD扩增产物的检测使用琼脂糖凝胶电泳。 相似文献
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甜菜SCoT-PCR反应体系的建立及优化 总被引：2，自引：2，他引：0
旨在利用SCoT分子标记技术为甜菜指纹图谱构建、遗传多样性分析以及其他分子标记辅助育种提供技术支持。本研究利用单因素实验优化了甜菜SCoT-PCR反应体系。结果表明,在20 μL反应体系中,甜菜SCoT-PCR最优反应体系包含2.0 μL的10×PCR buffer（含Mg2 ）、10 ng的DNA、0.5 U的Taq DNA聚合酶、10 μmol/L的引物2 μL以及0.1 μL的dNTPs (2.5 mmol/L each)。利用优化后的程序对12份糖甜菜品种进行扩增,结果表明,该体系扩增结果稳定、条带清晰,可用于甜菜品种指纹图谱的构建以及其他分子生物学领域的研究。 相似文献
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甜菜CDDP-PCR扩增体系的建立及优化 总被引：3，自引：2，他引：1
为了建立最优甜菜的来源保守DNA序列多态(conserved DNA-derived polymorphism,CDDP)分子标记扩增体系,以期利用CDDP分子标记技术进行甜菜品种指纹图谱的构建、核心种质构建及分子标记辅助育种。本实验利用单因素变量的方法对甜菜CDDP体系进行优化;最终确定了甜菜最适CDDP体系,体系总体积为20μL,其中包括10μL MIX,0.5μL引物,0.5μL DNA模板。利用优化的体系对8个甜菜二倍体品系进行扩增,结果表明所有材料都能扩增出清晰稳定的条带,并且多态性丰富,由此可以说明本研究对CDDP进行优化的体系非常适合甜菜CDDP-PCR分析。 相似文献
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