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喜树是中国传统的珍贵药用植物,因其含有抗癌、抗病毒药物喜树碱而被广泛关注。然而喜树碱在喜树中的低积累量限制了其在市场上的应用,因此喜树碱生物合成途径关键酶基因功能的鉴定及其代谢途径的解析变得尤为重要。稳定遗传转化因其周期长、效率低而无法快速鉴定相关基因,瞬时转化则具有高效、方便、易操作等特点。利用瞬时转化可望更快速地解析未知代谢途径,进而调控喜树碱的合成、提高喜树碱的含量。目前喜树中瞬时转化研究较少,并且在前期实验中发现,选取同时期不同个体的喜树叶片进行瞬时转化,会因生理生化差异导致实验数据误差较大,进而增加实验结果分析的难度。所以,建立一种降低个体差异的喜树叶片瞬时转化方法具有重要的理论价值和现实意义。本研究以转化p BI121GD(GUS DELETED)和p BI121(35S::GUS)的根瘤农杆菌GV3101分别侵染喜树同一叶片左右部分,在侵染后不同时期进行GUS染色以检测同一叶片的左右部分GUS蛋白的表达差异,并利用半定量RT-PCR来检测GUS基因的转录水平。结果表明:与对照组比较,在侵染后的第7天实验组中的GUS基因和GUS蛋白均有较高的表达。上述结果表明,成功的在喜树中建立了一种降低个体差异的喜树叶片瞬时转化方法。 相似文献
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