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豇豆胰蛋白酶抑制剂和硫氧还蛋白的融合表达和活性测定 总被引：2，自引：0，他引：2
采用融合蛋白表达技术，通过1个人工设计合成的柔性接头，将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因与表达载体上的硫氧还蛋白(thioredoxin )基因连接，构建了融合表达载体。将表达载体转入大肠杆菌(Escherichia coli )GI724，通过色氨酸诱导获得高效表达，产物以可溶状态存在。活性测定显示，融合蛋白具有抑制胰蛋白酶的生物学活性。以大豆胰蛋白酶抑制剂为参照，将融合蛋白热处理后进行活性测定，发现它具有较好的热稳定性。将肠激酶(enterokinase)与融合蛋白在37 ℃作用16 h，可获得切掉thioredoxin的CpTI蛋白。活性测定显示，切除thioredoxin后CpTI的胰蛋白酶抑制活性比同样处理条件下的thioredoxin-CpTI明显下降，比活力仅为原来的80%，说明融合蛋白具有更高的稳定性。研究结果为thioredoxin-CpTI作为一种生物农药的应用奠定了基础。 相似文献
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人工合成Cecropin AD基因在酵母中表达 总被引：6，自引：2，他引：4
Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 是由Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ａ的Ｎ 端１ １１ 位氨基酸残基和Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｄ 的Ｃ 端１２ ３７ 位氨基酸残基构成的一个杂合肽,抗菌活性高于天然抗菌肽。根据Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 的氨基酸序列,以酵母偏爱密码设计了Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因,全长１４０ｂｐ 。采用基因片段化学合成结合ＰＣＲ 法合成Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因。合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因克隆到ｐＣＲＴＭ２１ 上,进行ＤＮＡ 序列测定,证实合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因的ＤＮＡ 序列与设计序列完全一致。将Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因定向克隆到大肠杆菌 酵母穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２ 的Ｂａｍ ＨＩ和Ｓａｌ Ⅰ位点上,构建成含Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因的重组质粒ｐＣＡＤ,将重组质粒转化入宿主酵母ＡＢ１０３ ,以大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１ 为指示菌,用活性蛋白酸性ＰＡＧＥ 法测定,具有抑菌活性,表明Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因在酵母中获得表达。 相似文献
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气相色谱-质谱联用法对菠萝、杧果和米蕉混酿果酒的香气物质的分析 总被引：2，自引：0，他引：2
采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用法对菠萝、杧果和米蕉果实混酿的果酒的香气物质进行了分析.结果表明,菠萝、杧果和米蕉混酿果酒的香气物质的化学成分与菠萝果酒有显著差异,其中混酿果酒的香气物质更为丰富,尤其是包含着更多的中、高沸点的香气物质.这为感观评价提供了仪器分析依据. 相似文献
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不同钠离子浓度下甜菜幼苗早期生理变化 总被引：4，自引：0，他引：4
甜菜具有高度耐盐性、耐贫瘠、强适应性等种植优点,通常被誉为开发和利用盐碱地的先锋作物。本试验选用甜菜品种ST13092进行各项生理指标的检测,通过对甜菜幼苗早期在不同Na+浓度胁迫下生理代谢变化的研究,进而找出适合甜菜生长的最佳盐度范围,为进一步在甜菜的盐碱地种植方面提供重要的理论基础。研究发现甜菜出苗率会随着钠离子浓度的增加而变低,植株的干鲜重及叶片相对含水量,在Na+浓度为25 mmol/L时会明显增高,之后随着Na+浓度增加而降低;过氧化氢酶(Fungal catalase,CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)活性会随着钠离子浓度的增加增高。这些结果表明低浓度钠离子会对甜菜这种耐盐植物的生长起到促进作用,而高浓度钠离子会抑制甜菜的生长。 相似文献
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海南海域海洋红酵母的分离鉴定和应用性能评价 总被引：3，自引：0，他引：3
从海南海域的海滩、红树林、渔港码头、产盐滩涂、入海河沟分离海洋红酵母,旨在从中筛选与养殖对象共生的优良菌株。从海南海域分离和纯化海洋红酵母,对海洋红酵母进行形态和生理学及分子生物学的鉴定,大量发酵海洋红酵母,提取分离类胡萝卜素并测定其含量,并将海洋红酵母与鱼虾等养殖对象共培养试验。结果表明,共分离了40多株酵母菌,经形态和生理鉴定以及产类胡萝卜素试验,筛选得到一个高产类胡萝卜素的红酵母属（Rhodotorula）菌株。该菌株在葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母提取物0.3%、核黄素2×10^-6 mol/L、pH 4.5的培养基中,于28℃振荡（180 r/min）培养72 h,其细胞生物产量可达87.55 g/L,类胡萝卜素含量可达520 mg/L;可以在13%高盐和pH 1.0强酸中培养生长;经过与鱼共培养试验,结果显示在合适的菌体浓度条件下,该菌株对鱼无毒害,并与鱼共生。该菌株与鱼共生,显示良好的应用前景,将其应用于盐诱导基因启动子的克隆和盐诱导表达外源基因蛋白（如抗菌肽）的海洋红酵母工程菌的构建,可以更好地应用于水产养殖业。 相似文献
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奇楠沉香为极具收藏及药用价值的上品沉香,其鉴定目前以化学方法为主,但其种苗从苗期至采香之间则难以用传统分类和化学方法进行鉴定,DNA条形码的发展为这一产业难题的解决提供了新的思路。本研究在明确白木香良种‘热科2号’可产奇楠沉香的基础上,采用11对植物DNA条形码通用引物对‘热科2号’和普通白木香两个沉香品种进行分子鉴定探索,发现改良的CTAB法更适合白木香叶片样本的DNA提取,继而发现ITS、ITS2和源自叶绿体的8个DNA条形码在两个品种均无变异,而ITS1序列的第159个碱基在‘热科2号’中为T,在普通白木香中为A,多样本实验证明该变异位点可以作为‘热科2号’和普通白木香种苗鉴定的分子标记。本研究结果为白木香良种‘热科2号’及其幼苗的鉴定提供分子水平的技术支持,也为白木香良种的溯源提供新的思路。 相似文献
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