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本实验基于欧李转录组数据分析的基础上,利用RT-PCR方法从欧李品种‘农大4号’果实中克隆的到了ChCCD1基因,ChCCD1基因的CDS序列长度为1 644 bp,编码547个氨基酸的蛋白,分子量61.78 kD,等电点为6.05,不稳定指数为34.76。二级结构由α-螺旋,延伸链,β-折叠和随机卷须构成。蛋白三级结构建模分析发现,ChCCD1蛋白与玉米VP14具有相似的空间结构,具有7个由β-折叠组成的叶片,7个叶片中心含有4个组氨酸结合的Fe~(2+),构成了该酶的活性中心。通过同源氨基酸序列比对和进化树分析发现,ChCCD1编码的氨基酸序列与李和桃的CCD1基因相似性较高,达到99%。本研究为后续的基因的功能分析奠定了基础。 相似文献
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类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCDs)是类胡萝卜素氧化裂解的重要酶之一,在植物中,CCDs催化裂解产物具有重要的作用。本研究以欧李品种‘农大4号’果实为试验材料,根据转录组测序数据分析,利用RT-PCR从中克隆了到了ChCCD4基因。生物信息分析发现,该序列长度1 794 bp,编码597个氨基酸的蛋白,分子量为65 717.90 Da,等电点为6.10,蛋白质二级结构主要由α-螺旋,β-折叠,随机卷须和延伸链构成,ChCCD4蛋白三级结构与CCD蛋白家族三级结构相似,具有相同的结构域。将ChCCD4基因连接到原核表达载体pet-28a,转化大肠杆菌BL21 (DE3),诱导表达,目的蛋白经过SDS-PAGE凝胶电泳检测,与空白对比,检测出了目的蛋白条带。本研究为ChCCD4基因的功能研究提供理论依据,为欧李育种方向提供了理论参考。 相似文献
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利用RACE技术和RT-PCR相结合,从欧李[Cerasus humilis(Bge)Sok]果实中克隆获得长度为1798 bp的番茄红素β–环化酶(lycopeneβ-cyclase)基因ChLCYb的cDNA全长序列,开放读码框为1515 bp,编码503个氨基酸。序列分析发现,ChLCYb具有植物LCYb保守区(Plant LCYb conserved region)、FAD/NAD(P)结合区(Dinucleotide-binding signature)、"Cyclase motif 1"、"Cyclase motif 2"和"lycopeneβ-cyclase motif"等典型结构特征,在N–端存在1~84个氨基酸残基组成的转运肽信号序列,在85~106、209~227、373~391和460~480氨基酸区域包含4个跨膜结构域。荧光定量PCR结果表明,ChLCYb在叶中表达量最高,其次是幼果,在根中最低;在欧李果实发育过程中,果皮中ChLCYb表达量高于果肉,果皮中ChLCYb表达量先升高,在花后90 d左右表达量最高,然后呈缓慢下降趋势,而果肉中ChLCYb表达量相对平稳。ChLCYb表达模式与果皮和果肉中β–胡萝卜素含量的积累呈显著正相关(r=0.824和r=0.712,P0.05)。利用大肠杆菌工程菌体系诱导表达了ChLCYb蛋白,并证实其可催化工程菌株中番茄红素向β–胡萝卜素转化,其转化效率达71.22%。在番茄中超量表达ChLCYb促进果实中番茄红素向β–胡萝卜素的转化和积累,转基因株系L-11号果实中的β–胡萝卜素含量高达692.18μg·g~(-1) DW,是非转基因对照的4.42倍。 相似文献
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