基因工程实验教学中PCR反应条件的正交优化     

刘顺枝  邓剑锋  田长恩  王小兰  胡位荣 《安徽农业科学》2012,40(24):12276-12278

采用碱裂解法提取大肠杆菌的质粒DNA,检测提取到的DNA浓度和纯度,并以提取的DNA作为PCR反应体系中的模板,采用搜索性正交设计试验法探求PCR反应体系中4个因素(dNTPs、DNA模板、引物和Taq酶)在5个水平上的最适用量,在此基础上,进一步设计细调性正交试验筛选PCR反应的最适条件。结果表明,在20μl PCR反应体系中,DNA模板5 ng/μl,dNTPs 0.25 mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq酶1.5 U/μl,Mg2+浓度1.5 mmol/L时,PCR的效果最好。  相似文献   

油菜细胞质雄性不育系及其保持系不同发育阶段内源激素动态变化初探   总被引：14，自引：0，他引：14  

田长恩  张明永  段俊  黄毓文  刘鸿先  梁承邺 《中国农业科学》1998,31(4):20-25

利用酶联免疫测定技术研究了波里马（polima）油菜细胞质雄性不育系和保持系不同发育阶段叶片和花蕾中IAA、GAs、ABA和iPAs的动态变化。研究结果表明：（1）叶片和花蕾中GAs含量均先降后升,但不育系的含量比保持系的高。（2）不育系叶片中IAA含量先升后降,而保持系的与此相反,且前者的含量在大多数时期高于后者;不育系花蕾中的IAA先降后升,而保持系的却一直降低,且前者的含量高于后者。（3）两系叶片和花蕾中ABA含量变化趋势相似,但以不育系为高。（4）iPAs在整个检测过程中始终低于检测范围。提示不育系叶片和花蕾中IAA、GAs和ABA含量变化出现了异常,且明显高于保持系,这可能与雄性不育有关。  相似文献   

乙烯对水稻CMS系及其保持系蛋白质,核酸和活性氧化谢的影响     

田长恩  段俊 《中国农业科学》1999,32(5):36-42

用ＡＣＣ处理保持系会降低花粉的可育度,使其幼穗中蛋白质、ＤＮＡ和ＲＮＡ含量以及蛋白酶、ＲＮＡ酶和ＤＮＡ酶活性下降;并使Ｏ＾－２的生成速率和丙二醛含量上升,ＣＡＴ和ＳＯＤ活性下降,ＰＯＤ活性上升。用ＡＶＧ处理不育系,可使其花粉育性得以部分提高,使其幼穗蛋白质、ＤＮＡ和ＲＮＡ含量以及蛋白酶、ＲＮＡ酶和ＤＮＡ酶活性下降,并使Ｏ＾－２生成速率和丙二醛含量下降,使ＣＡＴ、ＳＯＤ和ＰＯＤ活性上升;ＡＣＣ可降低  相似文献   

植物生长调节剂在马铃薯生产中的应用     

田长恩 《中国马铃薯》1993,(4)

<正> 在马铃薯上应用植物生长调节剂可以打破块茎休眠、促进种子萌发、促进插穗生根和加速试管结薯,从而加速繁殖;也可以促进茎叶生长、控上促下,进而提高单产;还可以抑制萌发,延长块茎贮藏时间。  相似文献   

大麦EcoTILLING技术体系的优化     

夏岩石  李荣华  郭培国  宁正详  沈程文  田长恩  白盼  何其芳 《中国农业科学》2011,44(6):1292-1300

 【目的】建立适合于大麦的EcoTILLING技术体系,用于鉴定大麦目的基因或特定区域的自然突变。【方法】利用M13通用接头作荧光标记,采用巢式PCR对大麦目的基因进行扩增,从PCR扩增的退火温度及模板量、CELⅠ的用量和酶切处理时间等方面对大麦EcoTILLING技术体系进行了优化。【结果】用于第一次PCR扩增(10 μL反应体系)的大麦基因组DNA模板最佳用量为20 ng,第一次PCR扩增产物稀释3倍后作为第二次PCR扩增的模板,2次PCR扩增的适宜退火温度均为58℃;在20 μL CELⅠ酶切体系中,最适酶量为0.4 μL(3 U&#8226;μL-1),45℃条件下最佳酶切处理时间为17.5 min。【结论】优化的EcoTILLING技术体系能有效地发现大麦自然群体中特定区域的DNA多态性,降低了试验成本,为在大麦及其它作物上的广泛应用提供借鉴。  相似文献   

乙烯与水稻细胞质雄性不育的关系   总被引：11，自引：1，他引：10  

田长恩  梁承邺 《作物学报》1999,25(1):116-119

从幼穗发育的IV到VII期,水稻细胞质雄性不育系(珍汕97A)幼穗和叶片的ACC含量和乙烯释放速率均高于其保持系(珍汕97B)。外施乙烯释放剂乙烯利使保持系花粉可育度明显下降;外施ACC合成酶抑制剂AVG引起两系幼穗ACC含量和乙烯释放速率下降,并使不育系花粉育性得以部分恢复,而在外施AVG的同时再施以乙烯利则AVG的恢复作用消失。  相似文献   

植物生长调节剂在茶树上的应用     

田长恩 《茶业通报》1993,15(4):9-11

茶叶是我国最主要的饮料,在我国的种植面积很大,但是,由于多方面原因造成茶叶单产不高,质量下降,致使茶叶生产的经济效益低下。提高茶叶生产经济效益的措施很多,使用植物生长调节剂就是其中之一。研究与应用结果表明,正确使用植物生长调节剂可以加速茶树繁殖、提高茶叶产量、改善茶叶品质,从而提高茶叶生产的经济效益。本文将就植物生长调节剂在茶树上的应用效果与技术作简要介绍。  相似文献   

引导学生有效分析遗传学综合性实验结果的探索与实践     

汪珍春  周伯春  田长恩  胡位荣 《安徽农业科学》2012,40(23):11895-11897

以6#和2#果蝇的杂交为例,探讨了学生在实验过程中常出现的问题以及如何加强引导学生对实验结果的分析。认为分析"果蝇的综合杂交实验"的数据应从1对遗传因子分析到2对遗传因子分析,再到3对遗传因子分析;分析内容应包括性状的显隐判断、基因位置的确定、表现型比例和假设检验。同时,在实验的各个环节引导学生复习、巩固遗传学的基本原理。在实验的设计阶段让学生思考影响实验结果的因素。实践表明,学生对实验结果的分析不仅思路清晰、逻辑性增强,而且充分挖掘了实验数据所蕴含的信息,从而提高了遗传学实验教学质量。  相似文献   

植物生长调节剂在烟草上的应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

田长恩 《湖北农业科学》1995,(3):45-48

系统地介绍了植物生长调节剂在促进烟草种子的萌发，培养健壮烟苗，促进生长发育，增强抗逆性，抑制光呼吸和腋芽生长，催黄催熟，能有效地提高烟叶产量，改善烟叶品质，增加经济效益等方面的效果和使用方法初步提出推广意见。  相似文献   

转基因油菜种子抗性筛选中内生菌的鉴定与控制     

姚焱  王小兰  刘顺枝  汪珍春  黄富财  邱显程  田长恩 《种子》2009,28(4)

利用农杆菌介导的花蕾浸泡转化法将拟南芥生长素反应因子8(Auxin Response Factor 8,AtARF8)基因导入油菜花序后获得转化种子.在转化种子的抗性筛选中会产生种子内生菌污染现象.通过对内生菌的细胞学观察及PCR分子鉴定,确定种子内生菌来白转染的农杆菌LBA 4404;选择抗生素头孢曲松钠和硫酸庆大霉素进行抑菌H试验,50mg/L头孢曲松钠可似抑制农杆菌生长,同时对植株真叶数量、根系数量、株高、叶片颜色等影响较小.因此,头孢曲松钠可作为该转基因材料抗菌素抗性筛选中种子内生菌的抑制剂.  相似文献