一例猪附红细胞体病的诊治     

杨立军  邱璜  王成达  周存钦 《吉林畜牧兽医》2010,31(6):39-39

<正>猪附红细胞体病是由附红细胞体引起的,猪的一种血液原虫病,临床上以贫血、黄疸和发热为特征。1发病情况2010年5月4日,公主岭市一个存栏200头基础母猪的养殖场陆续出现少部分猪只高热、咳嗽、皮肤出血点、贫血、消瘦等症状。当地兽医用长效土霉素、安乃近、地塞米松处理后,效果不明显,3  相似文献   

PRRSV Hr-1/06株GP5蛋白基因的克隆及表达载体的构建     

卢高峰  夏平安  邱璜  李伟娟  王中明  刘明莉 《安徽农业科学》2008,36(26)

[目的]克隆PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因并构建其原核表达载体.[方法]根据PRRSV美洲株ATCC-VR2332的ORF5基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法从Hn-1/06株中扩增得到GP5蛋白基因的片段,与PTG19-T载体连接获得其阳性克隆PTG19-T-ORF5.以该基因片段为模板分别设计ORF5完整序列和删除信号肽的ORF5序列两条引物,进行PCR扩增,将目的片段与原核表达载体pET32a连接,并对其进行酶切鉴定.[结果]扩增得到GP5蛋白基因全长序列603 bp,编码200个氨基酸残基;具有3个潜在的N-糖基化位点和9个半胱氨酸;分子量为22.4 kD,等电点为8.550;双酶切pET32a-ORF5鉴定.结果与预期一致,证实重组质粒构建成功.[结论]成功构建了PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的表达载体,为深入研究GP5蛋白的本质与功能及其致病性奠定基础.  相似文献   

PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因表达载体的构建及高效表达     

卢高峰  夏平安  刘明莉  李伟娟  邱璜  李素平 《江西农业学报》2009,21(1)

通过对PRRSV Hn-1/06株ORF5基因序列分析,设计删除信号肽和跨膜功能区的ORF5序列的3对引物,应用重叠延伸PCR以PTG19-T-ORF5质粒为模板进行扩增目的片段,得到长度为410 bp的片段。然后将此基因亚克隆到原核表达载体PET32a,经筛选获得了阳性重组质粒PET32a-ORF5abc,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为34 kD的融合蛋白GP5abc-His,Western blotting检测结果证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP2蛋白的原核表达     

刘明莉  李伟娟  王中明  邱璜  卢高峰  夏平安  李素平  崔保安 《江西农业学报》2009,21(3)

根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771 bp的片段,并将扩增的片段插入pTG19-T载体进行测序而获得含有ORF2的阳性克隆pTG19-T-GP2。将此基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,经筛选获得了阳性重组质粒pGEX-GP2,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为45 kD的融合蛋白,纯化后经Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。  相似文献   

SOE-PCR法检测PRRSV ORF5缺失跨膜区的融合蛋白基因片段的研究     

刘明莉  夏平安  党占国  王中明  邱璜  卢高峰  李伟娟 《黑龙江畜牧兽医》2009,(3)

PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框（open reading frames,ORFs）,其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白：糖基化囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。糖基化囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,分子质量约为25ku。重叠延伸PCR技术简称SOE—PCR,又称重叠区扩增基因拼接法、交错延伸剪接PCR技术或套叠PCR技术。此技术利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变,而且不需要内切酶消化和连接酶处理。研究在分析了GP5蛋白跨膜区之后,采用SOE—PCR的方法将跨膜区基因缺失,对GP5蛋白编码跨膜区外的基因片段进行了克隆,旨在为获得高表达、高活性的基因产物打下基础。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染对仔猪免疫机能影响的差异     

夏平安  李伟娟  周海范  卢高峰  刘明莉  邱璜  王中明  崔保安 《中国兽医学报》2009,29(6)

20日龄猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阴性健康仔猪滴鼻感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) Hn-1/06强毒株和BJ-4弱毒株,于接种后0、5、11、18、30、40、50 d无菌采血,制备血清和分离白细胞,并在感染猪发病死亡或第50天后分别剖杀取各器官组织.经RT-PCR方法检测,强弱毒株在血清、白细胞和各组织器官内分布基本一致;经ELISA方法和免疫荧光抑制试验及IFA流式细胞术检测,强弱毒株感染均诱导机体产生抗N蛋白抗体,强毒株的抗N蛋白抗体产生早于弱毒株;强毒株感染未能诱导产生中和抗体,弱毒株感染后第30天诱导产生了较低水平的中和抗体,随后逐步升高;在整个感染过程中,强毒感染猪CD3+T淋巴细胞及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群均下降,CD4+/CD8+比值远远小于对照组,弱毒感染猪CD3+T淋巴细胞及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群先下降,40 d后逐渐恢复正常水平,CD4+/CD8+比值先下降,11 d后开始逐步上升,18 d后超过对照组,近50 d恢复到正常水平.结果说明,在强毒株感染过程中,细胞免疫被抑制,不能产生有效的体液免疫,导致病毒快速增殖复制;在弱毒株感染过程中,细胞免疫和体液免疫先被抑制,后免疫功能逐步恢复正常水平,使体内病毒进一步被清除.  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP3蛋白的原核表达与纯化   总被引：3，自引：0，他引：3  

王中明  李素平  夏平安  尹彦涛  李伟娟  邱璜  刘明莉  刘玉松  崔保安 《华北农学报》2009,24(1)

根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF3基因序列,利用Primer 5.0软件设计合成了1对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为765 bp的片段,并将扩增的片段插入pTG19-T载体进行测序而获得含有ORF3的阳性克隆pTG19-T-GP3.将此基因亚克隆到原核表达载体pET-32a,经筛选获得了阳性重组质粒pET-GP3,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为45 kDa的融合蛋白GP3-His,纯化后经Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性.从而为进一步研究PRRSV次要结构蛋白GP3的免疫特性和功能奠定了基础.  相似文献   

tPA信号肽和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原核表达载体的构建   总被引：2，自引：2，他引：0  

邱璜  夏平安  卢高峰  王中明  刘明莉  李伟娟  党占国 《中国畜牧兽医》2009,36(3):58-62

根据GenBank（序列号E00896）上公布的人组织型纤溶酶原激活因子（tissue plasminogen activator,tPA）的序列,利用在线信号肽分析工具Signal P3.0 Server预测出人tPA的信号肽共有63 bp,设计1对能互为模板直接进行扩增的特异性引物,通过重叠PCR的方法扩增出tPA信号肽。另设计1对连接引物,利用PCR方法将tPA信号肽与已删除自身信号肽的ORF5基因相连,成功构建了用tPA信号肽取代猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原有信号肽的原核表达质粒,为下一步GP5蛋白分泌表达及猪繁殖与呼吸综合征疫苗开发、诊断试剂盒的研制与应用奠定基础。  相似文献   

重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体间接ELISA方法的建立     

李素平  赵琳  夏平安  汪银锋  王中明  邱璜  刘明莉  徐红运 《江西农业学报》2009,21(3)

采用纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA试验的标准抗原,通过优化ELISA各种条件,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该方法具有良好的特异性和重复性。  相似文献   

PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的克隆及表达载体的构建     

卢高峰  夏平安  邱璜  李伟娟  王中明  刘明莉 《安徽农业科学》2008,36(26)

[目的]克隆PRRSVHn-1/06株GP5蛋白基因并构建其原核表达载体。[方法]根据PRRSV美洲株ATCC-VR2332的ORF5基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法从Hn-1/06株中扩增得到GP5蛋白基因的片段,与PTG19-T载体连接获得其阳性克隆PTG19-T-ORF5。以该基因片段为模板分别设计ORF5完整序列和删除信号肽的ORF5序列两条引物,进行PCR扩增,将目的片段与原核表达载体pET32a连接,并对其进行酶切鉴定。[结果]扩增得到GP5蛋白基因全长序列603 bp,编码200个氨基酸残基;具有3个潜在的N-糖基化位点和9个半胱氨酸;分子量为22.4 kD,等电点为8.550;双酶切pET32a-ORF5鉴定,结果与预期一致,证实重组质粒构建成功。[结论]成功构建了PRRSVHn-1/06株GP5蛋白基因的表达载体,为深入研究GP5蛋白的本质与功能及其致病性奠定基础。  相似文献