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1.
辣椒叶片RNA提取方法研究 总被引:2,自引:2,他引:0
以经过紫外线诱导处理的辣椒叶片为材料,分别用Trizol试剂快速提取法、尿素提取法和酚 SDS提取法提取其总RNA,比较各RNA产率、纯度及电泳图谱等,结果表明,尿素法提取的RNA28S和18S条带较为清晰,还可得到23S和16S带,较少有降解;而另2种方法所获得的RNA纯度较低,降解严重,琼脂糖电泳图谱通常只出现1条带. 相似文献
2.
以(Prunus salicina Lindl.var.cordataJ.Y.Zhangetal)5个不同生长发育时期叶片为试材,根据已构建的5个不同生长发育时期叶片的均一化全长cDNA文库,分离得到了一个羟脂酰-CoA脱水酶(HCD)基因,命名为PsHCD。对PsHCD基因生物信息进行分析,同时利用Real-time PCR检测PsHCD基因在叶片中5个不同生长发育时期的表达量。结果表明:该基因的cDNA开放阅读框编码区为第322个核苷酸到第987个核苷酸,编码221个氨基酸残基,5′UTR长度为321bp,3′UTR长度为156bp。利用TMHMM server软件分析,该基因编码的蛋白质有4个跨膜区域,PSORTⅡPrediction软件分析推测,亚细胞定位于内质网、微体和溶酶体中。实时荧光定量PCR结果表明,PsHCD的表达量随着叶片生长逐渐升高,在展开叶时达到最高峰,在幼叶到成熟叶时处于一种稳定水平,随后降低,老叶表达量最低。 相似文献
3.
乙醇酸氧化酶( glycolate oxidase,GLO)是植物光呼吸途径中的一种限速酶,催化羟乙酸盐氧化成乙醛酸盐和H2 O2,与植物的诱导抗病性密切相关。试验从已构建好的木奈( Prunus salicina Lindl.var.cordata J.Y.Zhang et al.)5个不同生长发育时期叶片的均一化全长cDNA文库中分离得到了一个乙醇酸氧化酶( GLO)基因,命名为PsGLO。序列分析表明,PsGLO基因cDNA全长为1531 bp,开放阅读框为1122 bp,编码374个氨基酸。氨基酸多重序列比对表明,该基因与陆地棉乙醇酸氧化酶基因相似性最高,为90%。荧光定量PCR分析表明, PsGLO基因在木奈叶中木奈叶芽、展开叶、幼叶、成熟叶、老叶5个不同生长发育时期中都有表达,其中,老叶中表达量最高,叶芽最低。 相似文献
4.
以嫩芽为材料,对Trizol法进行改进提取总RNA,试验结果表明,加入10%PVPP与材料共研磨,并在Trizol提取液中加入1%β-巯基乙醇,可以完全排除酚类物质、色素等杂质的干扰;采用在匀浆液中加入终浓度为20%乙醇沉淀多糖、在裂解液抽提的上相中加入终浓度为3 mol/LLiCl沉淀RNA、在RNA的粗提液中加入适量的3 mol/LNaAc(pH5.2)和低浓度的无水乙醇沉淀多糖等方法相结合,可以有效地去除多糖的干扰,获得纯净、完整的RNA样品,用它为模板进行RT-PCR反应,获得PPO基因保守区约600~800 bp的cDNA条带;而单独采用在匀浆液中加入终浓度为20%乙醇沉淀多糖的方法,不能将样品中的多糖去除干净,这些残留的多糖会抑制逆转录酶的活性,导致逆转录反应的失败. 相似文献
5.
6.
7.
8.
为探究夜来香生物钟的调控机制,本研究从花瓣均一化cDNA文库EST序列中获得Dof基因的部分cDNA序列,通过RACE获得Dof基因的全长cDNA,命名为CnDof,在此基础上,采用APA-Genomic walking技术,分离获得该基因的启动子,启动子长度为2054 bp,通过在线软件PlantCare分析顺式作用元件.结果表明:该基因全长cDNA为2 087 bp,ORF为1530 bp,编码一条含510个氨基酸的多肽链,在该多肽链的N端有典型Dof结构域,可初步推断,该基因是Dof的同源基因;所获得的启动子中含有大量与光反应相关的元件,可初步推测,Dof基因可能参与夜来香生物钟的调控. 相似文献
9.
以切花菊‘白扇’的带腋芽茎段为外植体,以次氯酸钠为表面消毒剂,确定最佳的消毒浓度及消毒时间;以山梨酸钾、次氯酸钠和代森锰锌为抑菌剂,确定开放式初代、继代和生根培养基中抑菌剂的最佳组合,建立开放式组培快繁体系。试验结果表明:外植体最佳消毒条件为0.1%(V/V)次氯酸钠消毒15 min;在初代培养基中,抑菌剂最佳组合为50 mg/L代森锰锌、0.01%(V/V)次氯酸钠和5 mg/L山梨酸钾,该组合的污染率较低,为36.7%。开放式培养中芽的生长情况、诱导率均无显著差异;在继代增殖和生根培养阶段,抑菌剂的最佳组合为40 mg/L代森锰锌、0.01%(V/V)次氯酸钠和5 mg/L山梨酸钾,芽的增殖系数和生根率较高,分别为5.93%、80.0%,芽生长良好,与常规组培无明显差异。 相似文献
10.
为了研究茉莉花花香代谢相关分子机制,本研究基于茉莉花转录组测序结果,采用PCR技术从双瓣茉莉花花瓣的c DNA文库中克隆出苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)的全长c DNA,命名为Js PAL2。该c DNA的全长为2 181 bp,其中ORF为2 079 bp,编码693个氨基酸的蛋白,分子量为75 599.19 u。序列分析结果表明,该基因编码的氨基酸序列与油橄榄(Olea europaea)的PAL具有82%的同源性。利用100μmol/L的外源激素茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)喷施成熟花苞,并采用荧光定量PCR技术检测Js PAL2在茉莉花发育过程、开放过程以及经Me JA处理过后花朵中的表达量变化。结果表明,在花蕾生长发育时期,Js PAL2的表达量随着天数的增加而升高,在5 d时达到最高;在不同开放时期,18:00花朵未开放时Js PAL2表达量最低,22:00花朵半开放时表达量最高;经外源茉莉酸甲酯处理后,Js PAL2的表达量明显增加,在处理后7 h达到最高,随后逐渐降低,推测该基因可能与茉莉花香气物质的合成有关,同时Me JA可能对其表达有诱导的作用。 相似文献