猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ基因的克隆、表达及其免疫原性   总被引：1，自引：2，他引：1  

严克霞  刘建杰  吴斌  汤细彪  蔡利军  杨明柳  陈焕春  周锐 《农业生物技术学报》2006,14(4):493-497

以本实验室分离的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型(Actinobacilluspleuropneumoniaeserotype2,APP-2)菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871bp的APP毒素Ⅱ的结构基因apxIIA,并克隆到pET-28a原核表达载体中构建重组表达质粒pET28aIIA,转化到大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3),经SDS-PAGE和Westernblot分析表明,表达的重组蛋白具有良好的反应活性。将表达的蛋白经或不经复性处理,与纯化的天然毒素Ⅱ分别免疫昆明小鼠,同时设PBS空白对照组,每组12只,间隔2周免疫2次,采血检测其抗体效价,二免后2周用致死剂量的APP血清7型(APP-7)菌株(1.08×108CFU(菌落形成单位,colonyformunit)/只)腹腔攻击。结果显示,复性蛋白组的保护率为83.3%,非复性蛋白组的保护率为58.3%,天然毒素蛋白对照组保护率为91.7%,空白对照组小鼠全部死亡,说明复性的重组毒素Ⅱ具有良好的免疫原性。  相似文献   

规模化猪场主要病毒性疾病血清检测实例分析     

严克霞  刘建杰  李小斌 《今日养猪业》2013,(1)

目前,猪瘟、蓝耳病、伪狂犬病、口蹄疫是影响规模化猪场生产的主要疫病,其免疫、发病情况直接决定了猪场的生产水平和经济效益.某万头猪场连续几年生产成绩持续徘徊在较低的水平,全群正品率只有70％左右,特别是保育阶段正品率只有80％.对猪场造成严重影响.发病后猪场病急乱投医,用了很多昂贵的疫苗和药物,效果一直不理想.为了摸清猪场存在的主要问题,对上述四种主要疫病的免疫状况做了一次全面检测分析,厘清了猪场的问题所在.  相似文献   

海南规模化猪场主要致病菌的分离鉴定及药敏试验     

严克霞  刘建杰  索绪峰  王大林  李小斌 《畜牧与兽医》2013,45(8):117-118

<正>为摸清海南规模化猪场流行的主要呼吸道及消化道细菌性病原微生物,从2009年到2011年,我们对海南省细菌性疾病多发的规模化猪场所送检的样品,有针对性地对主要病原进行了细菌分离、生化鉴定,并对所有分离到的细菌进行了21种常用药物的药敏试验,以探讨分离菌的耐药情况,为临床用药提供参考,现将结果报道如下。  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素II基因的克隆、表达及其对小鼠的保护性研究     

严克霞  刘建杰吴斌 周锐陈焕春  刘维红汤细彪蔡利军  杨明柳 《农业生物技术学报》2006,14(4):569-573

根据低分子量谷蛋白亚基(LMW-GS)基因编码区保守序列设计引物，对钩刺山羊草(Aegilops triuncialis L, 2n=4x=28, CCUU)PI483029总DNA进行PCR扩增，得到长度为900和1 065 bp的DNA片段，克隆测序后获得2个LMW-GS基因，GenBank登录号分别为AY841016和AY841017。它们具有小麦LMW-GS基因的典型结构特征。其中，AY841017具有完整编码区，长度为1 065 bp，可编码322个氨基酸残基的成熟蛋白，第一个半胱氨酸残基出现在重复区第13位。在重复区，AY841017的两个疏水单元为PIIIL和PVIIL，重复区中还存在一个连续13个Q(谷氨酰胺)组成的短肽。AY841016由于编码区内存在提前终止密码子，为假基因。氨基酸序列比较发现，AY841017与普通小麦(Iriticum aestivum L.)Glu-D3位点编码的LMW-GS基因有很高的一致性。  相似文献