转基因玉米NK603品系成分LAMP快速PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

甄贞  张明辉  刘营  敖金霞  于艳波  李璐  曲波  仇有文  高学军  张克俭 《中国农业大学学报》2015,20(3):24-29

根据转基因玉米品系NK603外源插入片段与玉米基因组序列设计品系特异性引物,建立转基因玉米品系NK603的品系特异性环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行灵敏度、特异性测试。试验表明该方法能够快速检测出转基因玉米NK603品系成分,检测灵敏度为0.1%,并具有较高的特异性和较好的稳定性。  相似文献   

转基因小麦B73-6-1外源基因拷贝数的确定   总被引：1，自引：0，他引：1  

甄贞  段俊枝  于艳波  曲波  袁肖寒  高学军  栾凤侠  张明辉 《河南农业科学》2016,(4):19-22,30

为了确定转基因小麦B73-6-1中外源基因HMW-GS的拷贝数,以期为HMW-GS基因的整合位点和遗传表达研究奠定基础,构建了含有外源基因HMW-GS的标准品,并以wx012基因作为内源参照,通过实时荧光定量PCR方法,进行了3次重复试验。结果表明,在3组试验中得到的HMW-GS基因分子数分别为8.62×1018、4.34×1018、1.10×1018个,wx012基因分子数分别为6.27×1017、3.14×1017、7.84×1017个,经计算HMW-GS基因拷贝数分别为13.75、13.84、14.01个,由此确定转基因小麦B73-6-1中HMW-GS外源基因的拷贝数为14个。  相似文献   

防御素基因克隆和表达载体构建     

凌华  李璐  韩放  于艳波  李景鹏 《东北农业大学学报》2004,35(4):422-426

人防御素(HNP)是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对于细菌、真菌乃至某些被膜病毒有广谱杀伤作用,是免疫系统中的重要组分。实验根据已发表的HNP-1cDNA序列,设计并合成了一对引物。以HL-60细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pUC18载体上,经筛选获得阳性重组子pUC18-HNP-1(pDFS1)。测序分析证实,扩增片段即为HNP-1cDNA。pDFS1再经SmaI与SalI酶切、插入pGEX-6p-1质粒构建HNP-1表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子最终获得pGEX-6p-1-HNP-1(pDFS2)重组质粒。  相似文献   

三重巢式PCR技术检测抗草甘膦转基因大豆深加工产品   总被引：3，自引：0，他引：3  

张明辉  高学军  于艳波  秦君  李庆章 《农业生物技术学报》2006,14(5):752-756

实验以7种具有代表性的含有大豆成分的深加工产品(卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉、大豆粗油、大豆精炼油和大豆色拉油)作为样品进行定性检测，第一轮三重PCR均未能扩增出任何大豆成分，其灵敏度为0.5％。第二轮三重PCR可以扩增出除大豆精炼油和色拉油以外的所有深加工产品的内源基因Lectin、35S-CTP和EPSPS-NOS基因，其检测灵敏度达到0.005％，结果提示三重巢式PCR检测方法适用于大豆深加工产品的定性检测。  相似文献   

转基因大豆、玉米、水稻深加工产品的五重巢式 PCR技术检测   总被引：8，自引：2，他引：6  

敖金霞  高学军  于艳波  曲波  李庆章 《中国农业大学学报》2010,15(2):93-99

本试验针对已商品化的转基因大豆、玉米和水稻的主要外源基因Cry1A(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因和PAT基因及共有的内标准基因RBCL基因设计了10对引物,对从超市购买的进口大豆、玉米和水稻的11种深加工制品(未标注是否含有转基因成分)进行了五重巢式PCR定性检测。第1轮普通五重PCR检测,11个待测样品均未出现任何转基因成分,其灵敏度为0.5%;第2轮将普通五重PCR扩增产物进行五重巢式PCR检测,结果在卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品和婴儿米粉中扩增出RBCL基因,玉米淀粉和玉米泥中扩增出RBCL基因、Cry1A(B)基因和PAT基因;玉米蛋白粉扩增出RBCL基因、Cry1A(B)基因和BAR基因,营养麦片扩增出内参RBCL基因和Cry1A(B)基因,在大豆精炼油、色拉油和玉米油中未检测出上述2种基因和另外3种外源基因CP4-EPSPS、BAR和PAT,其检测灵敏度为0.005%。结果提示,五重巢式PCR检测方法适用于转基因大豆、玉米和水稻深加工产品的定性检测。  相似文献   

转基因水稻深加工产品两种荧光定量方法的比较研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

敖金霞  高学军  权东升  徐迪  于艳波  李璐  袁肖寒 《东北农业大学学报》2011,42(1):34-39

根据转基因水稻中外源基因Cry1A(B)和内源基因SPS设计SYBR Green I引物、TaqMan引物和荧光探针,以内源基因SPS作为内参照,使用两种FQ-PCR方法对水稻深加工产品中转基因水稻的含量进行定量检测.建立了转基因水稻标准品Cry1A(B)和SPS之间的△Ct与样品中转基因水稻含量百分比之间的校正曲线和...  相似文献   

耐除草剂转基因大豆质粒标准分子的构建     

仇有文  张明辉  于艳波  甄贞  王傲雪  高学军 《中国农业大学学报》2014,19(3):49-54

以A2704-12、A5547-127、MON89788和GTS-40-3-2等4种商品化耐除草剂转基因大豆为材料,构建质粒标准分子用于解决转基因作物检测时标准物质缺乏现状。采用双酶切技术,将扩增的大豆内参基因和耐除草剂转基因大豆转化体特异性片段克隆至pMD18-T载体上。结果显示,质粒标准分子定性PCR特异性序列片段的LOD均为20copies/μL,定量检测体系Bias最大值≤9.89%,CV最大值≤5.96%,SD最大值≤0.06,实验得到的所有偏差值均在允许范围之内,构建的质粒标准分子适用于4种耐除草剂转基因大豆特异性检测。  相似文献   

实时荧光定量PCR技术在转基因大豆A5547-127检测中的应用     

仇有文  张明辉  于艳波  王傲雪  高学军  敖金霞  袁肖寒  刘营 《东北农业大学学报》2013,(7):6-10,2

采用实时荧光定量PCR技术检测耐除草剂转基因大豆A5547-127,并对检测方法的精确度和准确度指标进行评估,分析检测方法的特异性和适用性。结果表明,定量PCR检测方法的LOD和LOQ分别是1和10copies.μL-1,检测方法试验得到的所有偏差值均在允许范围之内,表明建立的定量PCR检测方法能够为转基因大豆A5547-127提供科学的定量检测依据,为转基因作物的鉴定、检测提供新方法。  相似文献