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以中性内切葡聚糖酶基因EG和真菌Corticium rolfsii的碳水化合物结合模块(FCBM)为模块,构建融合基因重构体EG-FCBM和CD-FCBM,并利用高效表达载体在毕赤酵母中对其进行高效表达。酶活及性质分析显示,EG-FCBM和CD-FCBM在诱导表达84~96h后,其对微晶纤维素的活力分别为951和676 U·mL-1,较原始基因EG(526U·mL-1)提高81%、28%,而酶学性质两者间无较大差异。这一结果表明,FCBM在催化水解纤维素的过程中有着极为重要的作用,通过增加FCBM来提高纤维素酶活性方法可行。 相似文献
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建立适宜金龙胆草DNA 的SRAP-PCR 扩增体系为金龙胆草分子标记打下基础,针对常规银染方法从
是否固定银染液组成银染时间显影液组成等方面优化了金龙胆草SRAP 扩增产物的检测方法同时探索了金龙
胆草SRAP-PCR 反应程序,并对金龙胆草SRAP-PCR 反应体系的各影响因子进行优化结果建立了一个银染步骤
快速高效的银染检查方法筛选的退火温度为51.3,最佳SRAP-PCR 反应体系(15 L) 为院DNA 40 ng,引物浓度
0.7 mol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Mg2+1.9 mmol/L,Taq 聚合酶0.6 U,10buffer 2 L,双蒸水补足该程序和体系能很好
地满足金龙胆草基因组SRAP 扩增的要求SRAP 标记应用于金龙胆草遗传研究是可行的。 相似文献
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查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)是植物类黄酮化合物合成的第一关键酶。为了获得金龙胆草(Conyza blinii Lévl.)CHS基因,本研究采用快速扩增cDNA末端(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆得到了金龙胆草CHS基因的DNA和cDNA全长序列,并进行生物信息学分析,通过RTPCR检测该基因在花期不同组织部位中的表达情况并检测对应部位的相对花青素含量。结果表明,获得的CHS基因DNA全长2 098 bp,包括2个内含子;cDNA全长为1 692 bp,含有完整开放阅读框(1 197 bp),编码399个氨基酸,包含查尔酮合酶的标志性序列,命名为CbCHS(GenBank登录号:KJ155749)。序列比对结果显示,金龙胆草CbCHS基因与已报道的其它植物的CHS氨基酸序列具有很高相似性(最高为95%)。半定量RT-PCR结果显示,在叶和茎的表达量最高,相对表达量分别达到87.03%和98.33%,表达量之间没有显著差异(P0.05);在根中CbCHS基因表达量最少,相对表达量仅为9.43%,表达量与其余部位具有显著差异(P0.05)。花青素含量也以茎和叶中最高,根中微量,表明CbCHS基因与花青素的蓄积有一定相关性。本研究首次克隆了金龙胆草CbCHS基因的全长DNA及cDNA序列,研究了其在花期不同组织器官中的表达量差异及与花青素的含量关系,为进一步研究CbCHS基因对金龙胆草黄酮含量的影响及其调控机制提供了基础资料。 相似文献
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为建立快速高效的金龙胆草Conyza blinii H.Lév.组培快繁体系,考察不同生长时期组培样叶片中苦蒿素含量,合理利用并保护金龙胆草药材种质资源,本研究筛选野生金龙胆草幼嫩叶片为外植体,以MS和1/2 MS为基本培养基,探究组织培养各个阶段的最适培养条件。在此基础上,采用HPLC法测定不同生长时期组培样同一叶位叶片中苦蒿素的含量。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基配方为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L,诱导不定芽的最佳培养基配方为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导不定根的最佳培养基配方为1/2 MS+GA30.1 mg/L+IBA 0.1 mg/L。炼苗后移栽的最佳基质是腐殖质和珍珠岩2:1混合。以高效液相色谱仪对不同生长时期金龙胆草组培样叶片鲜样苦蒿素含量进行分析,结果表明移栽3个月5个月7个月1个月炼苗14 d未炼苗。本试验建立了稳定高效的金龙胆草组培快繁体系,并成功获得再生植株,为丰富金龙胆草种资质源提供了理论依据。 相似文献
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DDRT-PCR技术分析籽粒苋镉胁迫下相关基因的差异表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以镉污染修复植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)的根、叶、果为实验材料,利用DDRT-PCR技术分析籽粒苋Cd胁迫下基因表达水平的变化。结果表明:回收差异片段获得镉处理诱导的4个差异表达序列(EST-1、EST-2、EST-3和EST-4),经Blastn比对,EST-1与土人参26S核糖体RNA基因部分序列(GB|HQ843466.1)一致性为99%,EST-2与虎耳草26S核糖体RNA大亚基基因部分序列(GB|AF036498.1)一致性为93%,EST-3与大肠杆菌菌株TW14359 DNA聚合酶Ⅲα亚基基因(ECs0186)完整CDS(GB|EU906049.1)一致性为97%,EST-4与米曲霉RIB40 β-葡萄糖苷酶基因(XM_001816779.2)一致性为99%;经Blastx比对,EST-1与假定蛋白MTR_5g051030[苜蓿](XP_003614386.1)氨基酸序列相似性为26%,EST-2与假定衰老相关蛋白[柏杉](GB|ACA30301.1)氨基酸序列一致性为98%,EST-3与DNA聚合酶Ⅲα亚基 [大肠杆菌OP50](ZP_06935700.1)氨基酸序列一致性为100%,EST-4与β-葡萄糖苷酶[黄曲霉NRRL3357](XP_002383240.1)氨基酸序列一致性为99%;4个差异表达基因通过调控蛋白质代谢、DNA复制和糖代谢等途径来应答镉胁迫。 相似文献
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