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旨在利用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)技术对牦牛肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)在低氧和常氧不同培养条件下的蛋白组学进行差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)分析,进而了解高原牦牛PASMCs的DEPs。本试验采用贴壁培养法培养PASMCs,分别在低氧与常氧条件下培养72 h,然后收集细胞,提取两组细胞的总蛋白,利用TMT标记蛋白定量技术筛选DEPs进行分析,并进行GO功能注释和KEGG通路分析。在比较低氧和常氧下PASMCs的2组蛋白样品中共获得6 859个蛋白,以FC (fold change)≥1.3或≤0.78,且P<0.05条件进行筛选,获得DEPs共531个,其中上调DEPs有186个,下调DEPs有345个。富集分析结果表明,DEPs主要富集在中枢碳代谢、糖酵解与糖代谢合成、HIF-1信号通路、次生代谢产物的生物合成等低氧适应相关通路中。在这些通路中发现其中有7个重要的DEPs (PGK、HK、LDH、PGAM、pfkA、IL6ST、PDK1)。亚细胞定位中质膜(28.9%)所占比例最高。结构域分析中主要以表皮生长因子样结构域为主。结果表明,DEPs分别富集在代谢、酶活性、低氧适应性等相关类别与通路中,并发现7个重要的DEPs (PGK、HK、LDH、PGAM、pfkA、IL6ST、PDK1)可能与缺氧环境的适应有关。这些结果为进一步研究牦牛PASMCs在低氧中的适应性提供了理论支持。 相似文献
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为了比较低氧条件下不同海拔牛种肾间质成纤维细胞（RIFs）内PDK1、Smad2、Caspase3等因子的表达差异及细胞增殖差异,并进一步探究牦牛肾脏的高原低氧适应性特点,本研究采用牦牛和黑白花牛RIFs作为研究对象,低氧（1%O2）处理后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹（WB）法检测细胞内PDK1等因子表达差异。波形蛋白（Vimentin）免疫组化染色鉴定结果显示,两种牛的原代RIFs纯度较高,可用于后续试验。低氧处理后,两种牛的RIFs内PDK1、Smad2及Caspase3的mRNA和蛋白表达均存在不同程度上调,且种属间存在显著差异（P<0.05）,牦牛HIF-1α、PDK1、Smad2及Caspase3等基因表达量于24 h达到峰值,之后下调,而黑白花牛基因则随时间呈递增趋势,且牦牛RIFs低氧下增殖能力低于黑白花牛。综上所述,低氧诱导的相关转录因子表达存在差异,两种牛RIFs的增殖能力存在差异,这可能是导致低氧下黑白花牛肾纤维化程度的加深,从而产生肾源性高原疾病的原因之一。本研究为比较不同海拔牛种肾脏的低氧适应性研究提供了基础数据,为探索牦牛肾脏... 相似文献
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为探究牦牛肾脏高原低氧适应性特点，比较低氧培养下牦牛肾细胞内LDLR基因和PDGFR-β基因与常氧培养下的表达差异，本试验以牦牛肾细胞作为研究对象，分别进行常氧（21%）和低氧（1%）处理，通过实时荧光定量PCR法检测细胞内LDLR基因和PDGFR-β基因的m RNA表达变化。结果显示：在低氧培养下，PDGFR-β和LDLR基因与常氧处理相比表达量显著下调（P<0.05），但PDGFR-β基因随时间增长而恢复正常水平，LDLR基因则一直处于低表达状态。此现象可能是牦牛肾脏能够适应低氧环境的主要原因之一，可为揭示牦牛低氧环境适应机制提供一定理论依据。 相似文献
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近年来低氧细胞培养逐渐成为研究热点，低氧条件下可提高细胞体外扩增的生长动力学、细胞的增殖率及干细胞分化等功能。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是应答低氧应激的关键因子，也是介导低氧信号的转导中枢，与其相关的血管内皮生长因(vascular endothelia growthfactor，VEGF)、低氧促有丝分裂因子(hypoxia-induced mitogenic factor，HIMF)及促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)等是其重要的靶基因，它们之间的相互作用对低氧条件下细胞的发生、发展有重要作用。笔者对低氧培养细胞的研究现状及低氧相关细胞因子的调控机制及作用进行概述，以期为探索细胞低氧机理提供理论依据，为低氧适应性及高原疾病治疗提供更多的研究思路。 相似文献
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