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伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
参考Genebank发表的伪犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)的gI和gE基因序列,自行设计并合成了两对引物,对PRV上海株(PRV-SH)进行PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,均呈现一条约960bp和1740bp的条带,将其克隆入pGEM-T-easy载体中,进行了序旬测定,将PRV-SH株的gI基因与Rice株gI基因比较发现,核苷酸的同源性为94.7%,氨基酸的同源性为91.3%,证实为gI基因,将PRV-SH gE基因序列与Ea株、Ruce株gE基因序列进行比较,结果显示,该序列与PRV Ea株、Rice株gE基因的同源性分别为98.5%、97.5%;的氨基酸序列与Ea株,Rice株和I型单纯疱疹病毒(HSV-1)17株gE的同源性分别为97.2%、94.8%和15.6%。 相似文献
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西尼罗热病毒RT-PCR检测方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
参考Genebank发表的西尼罗热病毒(West Nile virus,WNV)E糖蛋白基因序列,自行设计合成一对引物,对WNV进行RT—PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约400bp的条带,将其克隆入pMD18-T—Vector载体中,并进行序列测定,与已发表的WNV基因比较发现,核苷酸的同源性为99.7%,证实为WNV的E基因,通过对样品多次检测,都能扩增出一条约400bp的条带,表明该方法比较稳定。 相似文献
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新城疫病毒Ulster株经SPF鸡胚增殖和超速离心纯化后,以酚-SDS法提取其基因组RNA,作为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的模板。根据其已发表的F和HN基因核苷酸序列,合成一个长为30mer的寡核苷酸(位于F基因内)和一对分别长为28、30mer的寡核苷酸(位于HN基因两侧)分别作为反转录引物和PCR引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析,出现一条长为1.93kb的特异性条带,与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体pGEM-3Zf(+)中,并经限制性核酸内切酶分析(REA)。RT-PCR和REA结果证实其为新城疫病毒Ulster株的血凝素-神经氨酸酶基因。 相似文献
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新城疫病毒Ulster株血凝素—神经氨酸酶基因的克隆与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
析城疫病毒Ulster株经SPF鸡胚增殖和超速离心纯化后,以酚-SOS法提取其基因RNA,作为反转录-聚合酶链反应的模板。根据其已发表的F和HN基因核苷酸序列,合成一个长为30mer的寡核苷酸和一对分别长为28、30mer的寡核苷酸分别作为反转录引物和PCR引物。 相似文献
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从GenBank上调取猴痘病毒的基因序列,经过分析,找出了猴痘病毒的特异性靶基因序列F3L片段,人工合成猴痘病毒MPV(AF380138)F3L基因片段(48048-48509bp)并插入质粒,作为病毒检测的模拟阳性模板。根据该序列设计并合成PCR引物,对模拟的阳性模板进行扩增,结果能扩增出与目的片段大小一致的条带。建立了PCR检测方法,经条件优化后,对鸡痘、禽痘、羊痘等14种相似病毒核酸进行PCR扩增,发现具有良好的特异性。PCR方法能扩增出0.3pg的阳性模板,显示建立的PCR方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸猴痘病毒的检疫。 相似文献
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在伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)上海株gI基因和gE基因克隆鉴定的基础上,进一步构建了转移载体质粒,为PRV-SH的gE-gI基因部分缺失毒株的构建作准备,将gI和gE基因克隆入pUC18中构建pgEI载体,利用gE基因中的酶切位点缺失掉gE基因5′端363bp,并把录色荧光蛋白(GFP)基因表达盒插入到缺失部分。通过酶切鉴定,表明GFP基因已3插入到pgEI中,构建了含GFP的缺失转移载体pgEI-GFP。用DOTAP试剂将pgEI-GFP转染感染了PRV-SH株的兔肾(RK)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,并以GFP为标志,通过蚀斑法得到纯化重组病毒,命名为PFDE/DI。 相似文献
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施马伦贝格病毒是近期在奶牛血液中检测到的一种新型病毒,主要感染猪、牛、羊和野牛,主要通过蚊子、蠓传播。会造成动物精神不振、体质下降、厌食和腹泻等临床症状。本文从病原学、流行病学、诊断和防控等方面对该病进行了综述。 相似文献
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通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增了新城疫病毒(NDV)F48E8株核衣壳蛋白(NP)基因,并克隆到pUC18中,得阳性克隆pUCNP.应用分子克隆技术,将NP基因导入鸡痘病毒(FPV)转移载体pFG1175-1中P7.5启动子的下游,得到含NDV NP基因的质粒pFGNP1175-1.利用脂质体转染技术,将该质粒转染FPV疫苗株282E4感染3~4 h的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化多次,得到稳定的重组FPV.用狄高辛标记的探针进行斑点杂交实验,结果表明pFGNP1175-1已与FPV 发生同源重组;用抗NDV的SPF鸡的阳性血清进行间接免疫荧光实验,证实重组FPV在感染细胞中表达了F48E8株NP蛋白.该基因两端部分序列与已发表的D26株NP基因对应区域的核苷酸同源性为89.1%,推断的氨基酸同源性则为93.1%. 相似文献
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以伪狂犬病病毒SH株细胞培养物为模板,用PCR方法扩增蛋白激酶(PK)基因部分片段,克隆到pCDNA3中,序列测定显示所扩增的PK基因片段长907bp,与PRVNIA-3株的核苷酸同源性为99.6%。把PK基因克隆到pUCl9上,利用PK基因中间的SalI酶切位点,插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的基因表达盒,构成了含EGFP的转移载体,为今后研究PK基因的功能和构建PK缺失株奠定了基础。 相似文献