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脂多糖（LPS）在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究,但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29菌株waaL和waaG基因的缺失突变株,以了解突变体菌株产生的LPS结构与活性与野生菌株产生的LPS的差异。根据同源重组技术原理,利用广宿主自杀性质粒构建成敲除载体pKNG101△waaL和pKNG101△waaG,转化E.coli SM10菌株,并与B29菌株进行双亲杂交,再以抗生素和蔗糖筛选条件筛选waaL和waaG基因缺失突变株;利用多重PCR、ERICPCR、PCR-DGGE、DNA测序结果均证实突变株B29△waaL和B29△waaG构建成功;最后,对野生菌株B29与两个突变株生物学特性的差异进行了比较。银染实验结果表明野生型B29菌株的脂多糖为光滑型结构,突变株的LPS结构明显缺失O抗原,B29△waaG突变株同时还缺失了外部核心部分;用鲎试剂法检测LPS的内毒素活性显示,突变株的内毒素活性与野生型相比有较大幅度下降;B29△waaL突变株的生长速率与野生型相当,而B29△waaG突变株的生长速率则相对降低。本研究成功构建两种内毒素活性下降的突变株,为下一步利用突变株研究B29菌株在肥胖发生中的机制奠定基础。 相似文献
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土壤微生物在不同纤维素富集条件下的多样性 总被引：2，自引：0，他引：2
应用PCR-DGGE分子技术并结合聚类分析、主成分分析（PCA）等统计分析方法,对土壤微生物在几种不同的纤维素富集培养条件下的多样性进行分析.结果发现,不同的纤维素富集培养条件对土壤微生物的多样性有不同程度的影响：CMC和PCS两种培养基在50 ℃时所回收的土壤微生物的菌群结构和组成比较相似;纤维素富集培养基（J培养基）同CMC两种培养基所回收的土壤微生物菌群结构和组成却有很大的差异;50 ℃条件下所回收的土壤微生物其菌群结构和组成同28 ℃、37 ℃两个温度相比也相差较大.这一结果表明,组合不同的纤维素富集培养条件,结合分子和统计分析,可以对土壤样品在不同纤维素富集培养条件下微生物的多样性进行检测和评估,同时还可以为分离目标菌时富集培养条件的选择提供很有价值的参考. 相似文献
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