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细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP450)是高等植物中最大的酶蛋白家族之一,广泛参与植物的次生代谢和抗逆生理.本研究采用同源克隆和cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNAends,RACE)技术,获得苦荞(Fagopyrum tataricum) CYP81家族同源基因FtP450-R4 (GenBank登录号:KM271986).FtP450-R4 cDNA全长1770bp,5'-UTR为49 bp,3'-UTR为194bp,ORF为l 527 bp,其ORF序列可编码508个氨基酸残基的蛋白.生物信息学分析表明,FtP450-R4蛋白通过N-端4～24位氨基酸残基定位于内质网,与F3'H (flavonoid 3'-hydroxylase)、I2'H (isoflavone 2'-hydroxylase)和其他CYP450的同源性在44％～46％之间;多重序列比对显示,FtP450-R4具有CYP450中经典的基序和保守序列,但不含F3'H的特征基序(GGEK);系统进化树分析显示,FtP450-R4与拟南芥(Arabidopsis thaliana) CYP81家族和I2'H聚为一大簇,说明其可能参与苦荞黄酮类化合物的羟化或对逆境胁迫的应答.UV-B、寒冷和干旱均能引起FtP450-R4在苦养子叶中表达量的显著变化,而在胚轴中其表达量变化不显著.利用大肠杆菌(Escherchia coli) BL21 (DE3)菌株对FtP450-R4蛋白进行了可溶性表达,活性鉴定表明,重组FtP450-R4蛋白能以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, NADPH)和山奈酚为底物进行酶促反应,具有生物学活性.本研究可为了解CYP450在黄酮合成代谢中的功能,明确苦荞黄酮代谢调控的分子机制提供了基础资料. 相似文献
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苦荞生物活性肽生理保健功能的实现主要依赖于其自身的抗氧化活性,为此提出碱性蛋白酶水解苦荞的抗氧化活性研究。以西荞2号和2.4 AU/g的2709碱性蛋白酶为试验材料,在配制苦荞蛋白的基础上,以温度、pH值、2709碱性蛋白酶的使用量以及水解时间为因素指标,分别构建3个不同的因素水平,采用正交试验的方式进行测试。对于苦荞碱性蛋白酶水解抗氧化活性的检测,以DPPH自由基的清除能力和ABTS+自由基清除能力为评价指标。根据测试结果发现,在温度参数为45.0℃、pH值设置为9.0、2709碱性蛋白酶使用量为60.0 AU/g、水解时间为4.0 h的条件下,碱性蛋白酶水解苦荞的抗氧化活性最高;在测试的4个因素中,温度对苦荞水解产物的抗氧化活性影响最明显,其次是pH值;当达到最优水解时间条件后,水解时间对苦荞水解产物的抗氧化活性影响不显著。 相似文献
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