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本研究利用化学合成法合成了包含pCAMBIA0390左右边界T-DNA和LoxP／FRT（LF）位点的DNA片段Ⅰ,利用SacⅡ和SphⅠ酶切位点,去除了pCAMBIA0390左右边界T—DNA和多克隆位点之间的序列,然后连接DNA片段Ⅰ和载体片段,构建了植物表达载体pGM323-LF-enTP。随后,再合成含有适合在单予叶植物中表达的由玉米Ubi-1启动子驱动的融合标记基因（Bar：：gus）和水稻actin-1启动子驱动的助抗虫蛋白基因（Cry1A6）表达元件的DNA片段Ⅳ,在pGM323～LF—enTP的基础上,利用5以Ⅰ和PstⅠ位点构建了同时含有LF位点、Bar：：gus以及Cry1Ab基因表达元件的表达载体pGM626-LF—ABt。利用含有pGM626-LF—ABt的农杆菌遗传转化烟草和玉米,以草丁膦作为抗性筛选剂,非转化细胞得到了有效抑制,快速获得了转基W植株,利用GUS组织化学检测和RT—PCR分析了转基因植株中标记基因的表达,结果表明pGM626-LF—ABt可以用于农杆菌介导的单、双子叶植物遗传转化。本研究为培育安全抗虫转基因植物奠定了基础。 相似文献
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贵州10种玉米基因型组织培养再生体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
以贵州10种玉米基因型的幼胚为外植体,研究2,4-D浓度和基因型对玉米胚性愈伤组织诱导的影响,并进行再生体系研究。结果表明:不同基因型玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的最适2,4-D浓度不同:黔单19、黔单20、黔单23、09H313、大青233、益玉6号母本、益玉6号父本的最适2,4-D浓度为1.0 mg/L,遵玉母本为2.0mg/L,黔单21为3.0 mg/L。另外,不同基因型胚性愈伤组织的诱导能力及分化再生能力差异明显。其中,胚性愈伤组织诱导率较高的是遵玉母本和大青233,分别为81.87%和71.39%,而绿芽分化率较高的是黔单23和黔单21,分别为89.80%和80.00%。贵州10种玉米基因型中黔单23、黔单21和益玉6号父本表现出较好的再生频率,可为农杆菌介导遗传转化提供备选受体。 相似文献
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动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和Western杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果表明ChIFN-α基因的转化赋予了转基因烟草对TMV的抗性,进一步的荧光定量PCR差异表达检测结果表明,该抗性可能与转基因烟草体内防卫基因PR-la、抗病N基因和信号转导MAPK基因受到上调表达有关。 相似文献
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