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【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵,制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp1基因定点敲入小鼠,并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵,持续将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导野生型(WT)和纯合子(Mrjp1+/+)小鼠,比较不同时间收缩压和舒张压,以及胸主动脉中膜面积/管腔面积(Media/Lumen area)比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配,产生杂合子(Mrjp1+/-)小鼠,对Mrjp1+/-小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示,Mrjp1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp1+/-小鼠之间交配产生WT、Mrjp1+/- 相似文献
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基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了绵羊鸟苷素基因.从绵羊十二指肠黏膜组织中提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,PCR产物与pMD19-T载体连接后转化到E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆并测序.结果表明:克隆的绵羊鸟苷素基因长341 bp,编码109个氨基酸,与人、豚鼠、小鼠和牛的同源性分别为77%7、5%、47%和94%,推测的氨基酸序列信号肽为1~16 aa,整个氨基酸构成一个模域,编码鸟苷素前体蛋白. 相似文献
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基于电子延伸序列,克隆并分析了绵羊Gastorkine-1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gas-torkine-1基因长619 bp,编码185个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82.0%,48.8%,85.4%,96.9%,推测的氨基酸序列信号肽为1~20 aa,BRICHOS结构域为54~150 aa,结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。 相似文献
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摘 要：【研究目的】旨在建立检测仔猪小肠FcRn表达的地高辛标记探针原位杂交的方法,研究FcRn在仔猪小肠各段的表达分布。【方法】根据GenBank公布的猪FcRn 重链（α链）mRNA基因保守序列设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cDNA探针。经仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度选择,以及H2O2溶液祛除小肠组织中内源性辣根过氧化物酶作用对杂交结果的影响,选择合适的固定剂、细胞膜蛋白消化剂、杂交液和确定杂交反应的温度、时间以及杂交后处理等一系列试验条件优化,建立了检测仔猪小肠FcRn mRNA的原位杂交方法。【结果】①仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度为14 μm;②仔猪小肠内存在内源性辣根过氧化物酶,3％的H2O2溶液祛除该酶的效果良好,但在本研究中内源性辣根过氧化物酶的存在试验结果并无明显影响,无需祛除;③在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织的小肠腺和粘膜下层等部位存在棕黄色阳性颗粒,均检测到清晰的杂交信号。【结论】应用地高辛标记探针进行仔猪小肠FcRn mRNA的原位杂交方法检测效果良好;FcRn mRNA在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织等营养物质吸收部位均有表达,提示FcRn在这些部位的存在与肠道IgG转运的相关性。 相似文献
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