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为了提高检测效率,本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)扩增核酸,用横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)检测产物,建立了一种山茶根结线虫(Meloidogyne camelliae)的LAMP-LFD快速检测新技术.以山茶根结线虫核糖体DNA内转录间隔区(ribosomal DNA-intemal transcribed spacer,rDNA-ITS)为检测靶标,设计3对特异性引物进行生物素标记的实时荧光LAMP反应,优化后的LAMP扩增条件为63℃反应15 min.比较LFD、实时荧光曲线以及琼脂糖凝胶电泳等3种产物检测方法,结果表明,LAMP产物与异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针ITS-HP杂交5 min后即可在LFD上显色,从LAMP反应开始到LFD结果判断仅需25min,比常规PCR技术缩短约2h.LAMP-LFD技术能特异性地检测山茶根结线虫,对其基因组DNA的检测灵敏度为4 pg/μL,低于常规PCR方法100倍;对其单条2龄幼虫(J2)检测灵敏度为1/1 000条线虫.本研究建立的快速、灵敏、特异性LAMP-LFD检测技术可应用于山茶根结线虫的口岸检验. 相似文献
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以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为菌源,研究了不同配比复合益生菌对灰海马(Hippocampus erectus)幼苗养殖效果的影响。实验包括3个单菌处理和6个复合菌处理(3种菌1∶2∶3比例的随机组合),共9个加菌处理,另设无菌处理作为对照。用于评估养殖效果的指标包括:养殖水体菌群、幼苗特定存活率和生长率、幼苗肠道免疫指标(免疫球蛋白Ig M、白介素IL-1β、干扰素IFN-α和肿瘤坏死因子TNF-α)和肠道菌群。结果发现:加菌处理组中,其养殖水体均含有大量的目标益生菌,并且养殖水体的弧菌含量均显著低于对照组。幼苗存活率方面,除了D组(芽孢∶乳杆∶粪肠=1∶2∶3)、E组(芽孢∶乳杆∶粪肠=1∶3∶2)和F组(芽孢∶乳杆∶粪肠=2∶1∶3)的存活率显著低于对照组外,其他组存活率均显著高于对照组,其中G组(芽孢∶乳杆∶粪肠=2∶3∶1)和I组(芽孢∶乳杆∶粪肠=3∶2∶1)的存活率最高,均超过了65%。特定生长率除了B组(植物乳杆菌单菌处理)与E组外,其余各组之间均无显著性差异(P>0.05)。肠道免疫指标和菌群方面,存活率高的组别Ig M含量就高(通常指示免疫力水平),肠道内亦含丰富的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、植物乳杆菌和约氏乳杆菌(L.johnsonii);而存活率低的组别则Ig M含量低,而IL-1β、IFN-α和TNF-α含量高(往往是炎症的征兆),另外肠道内菌群比例失衡,益生菌丰度低。结果表明:复合益生菌的使用需要有一个特定的配比,配比合适益生效果优于单菌,配比失衡则不如单菌,甚至不及无菌,枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌和粪肠球菌按2∶3∶1或3∶2∶1配比混合使用效果最佳。 相似文献
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为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋... 相似文献
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