弹性蛋白酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达     

谷新晰  许文涛  黄昆仑  罗云波  林希谨  陈卓君  田洪涛 《农业生物技术学报》2009,17(6):1114-1118

本研究以一株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,经PCR扩增得到的弹性蛋白基因,与GenBank中的序列对比发现同源性为99%。将弹性蛋白酶基因连入到表达载体pPIC3.5K中,经过酶切和测序鉴定证实弹性蛋白酶基因已插入到载体启动子下游,成功构建了质粒pPIC3.5K/PAE。将pPIC3.5K/PAE线性化,通过电转化将目的基因转入毕赤酵母KM71中,利用MD培养基筛选到近400个转化子,再经G418抗性的筛选,获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子并用PCR和弹性蛋白平板验证。经过甲醇诱导表达得到高表达的重组酵母菌株,酶活为1060U/mL是出发菌株的26倍。本研究成功克隆到铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,为实现活性弹性蛋白酶的高效表达奠定了基础。  相似文献   

弹性蛋白酶基因(PAE)的克隆及在毕赤酵母中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

谷新晰  许文涛  黄昆仑  罗云波  林希谨  陈卓君  田洪涛 《农业生物技术学报》2009,17(6)

以1株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,经PCR扩增得到的铜绿假单胞菌弹性蛋白酶(P.acruginosa elastase,PAE)基因,与GenBank中的序列对比发现同源性为99%.成功地构建了重组表达载体pPIC3.5K/PAE,莺组质粒Sac Ⅰ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株KM71中,通过PCR和表型鉴定表明,PAE基因已经整合到毕赤酵母染色体上.经大量筛选获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子.在甲醇诱导下,经过毕赤酵母高密度发酵进行PAE的表达,经SDS-PAGE分析.结果表明,在培养基上清中含有一明显特异性蛋白条带,大小为34kD.活性检测结果,酶活为1 060 U/mL,是出发菌株的26倍.  相似文献   

单宁酸对生长獭兔毛皮品质、免疫器官发育及抗氧化能力的影响     

陈赛娟  刘亚娟  郅永伟  赵玉星  张斌  谷新晰  谷子林 《动物营养学报》2019,31(11)

  相似文献   

发酵饲料及在我国家兔生产中的应用     

谷子林  谷新晰  卢海强  刘亚娟  陈赛娟  陈宝江 《饲料工业》2020,41(5):1-7

文章概述了生物发酵饲料的基本概念、发酵的主要原料、菌种及发酵工艺;总结了生物发酵饲料在我国家兔生产中的应用效果,包括对生产性能的影响、替抗及对腹泻和成活率的影响、对营养物质消化率的影响、对产品品质的影响、对生理生化指标的影响、对肠道菌群的影响、对小肠黏膜形态的影响、对饲养环境的影响,以及对霉菌毒素的影响等。最后提出发酵饲料存在的问题及未来展望。  相似文献   

玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101的表达优化及在玉米浆脱毒中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈伟  谷新晰  李广靖  徐冉  谷子林  陈宝江  卢海强 《河北农业大学学报》2020,43(6):26-34

  相似文献   

利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

张玉兰  柯晓静  郭红敏  谷新晰  田洪涛  郭兴华  罗云波 《河北农业大学学报》2010,33(4)

为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响。结果表明:含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养至对数生长中期的细胞,在电场强度11.0 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,转化后细胞在SMRS培养基中培养2 h,获得了较高的电转化效率。采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率又提高了15倍以上,达1.05×105CFU/μg DNA。  相似文献   

产亚硝酸盐还原酶低温乳酸菌的筛选鉴定及发酵特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

卢海强  霍文敏  谷新晰  李晨  田洪涛 《河北农业大学学报》2015,(1)

为有效控制酸菜中的亚硝酸盐含量,降低食品安全风险,加快我国酸菜产业的现代化生产,本研究利用溴甲酚绿指示剂法对从黑龙江省哈尔滨地区采集的8份自然发酵的酸菜样品进行筛菌,共分离低温乳酸菌17株。经亚硝酸盐降解能力的评估,获得5株具有较强降解亚硝酸能力的低温乳酸菌,通过测定菌株亚硝酸盐酶活力获得了1株高产亚硝酸还原酶的低温乳酸菌R11,该菌在含125 mg/L NaNO2的MRS培养基中诱导48h,亚硝酸盐还原酶活力为68.4U/mL。菌株R11经形态学、生理生化特征、16SrDNA序列和构建系统发育树等方法分析,鉴定该菌株为冷明串珠菌(Leuconostoc gelidum),命名为Leuconostoc gelidum R11。发酵特性的初步研究结果表明,该菌具有良好的低温生长性能和产酸能力。因此,L.gelidum R11是1株产亚硝酸盐还原酶、发酵性能优良的具有巨大应用潜力的酸菜低温发酵菌株。  相似文献   

人源弹性蛋白酶基因原核载体构建及表达     

王海峰  许文涛  苏春元  黄昆仑  罗云波  谷新晰  邱芳萍 《沈阳农业大学学报》2010,41(5)

从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中.然后用限制性内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ对重组质粒pGEM-T easy/ELA2B和大肠杆菌E.coli表达质粒pET30a进行双酶切,成功构建了原核表达载体pET30a/ELA2B.将重组质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21中,通过PCR和表型鉴定表明,ELA2B基因已经整合到大肠杆菌BL21染色体上.用IPTG对重组的大肠杆菌BL21进行诱导表达,得到的蛋白经SDS-PAGE分析结果表明:菌体中含有一明显特异性蛋白,大小为28 kD.经包涵体复性后在弹性蛋白酶活性检测平板上发现有代表弹性蛋白酶作用的透明圈产生,可初步证实表达产物具有生物活性.  相似文献   

中国式干酪发展前景广阔     

邓立友  邓浩昌  田洪涛  谷新晰  焦新愿  伍州 《中国奶牛》2012,(11):35-36

本文介绍了国内外干酪产业现状,分析了我国干酪产业发展所遇到的瓶颈,探讨了我国干酪生产采用西方干酪生产模式的局限性,提倡以植物蛋白乳为原料的新工艺技术生产中国式干酪。  相似文献   

腌制臭鸡蛋中产细菌素乳酸菌的筛选及其特性分析     

谷新晰  卢海强  李晨  田洪涛  孟祥晨 《河北农业大学学报》2017,40(1)

为获得产细菌素的乳酸菌,本研究对自然腌制臭鸡蛋中的乳酸菌进行分离筛选;并进行抑菌、有机酸排除、过氧化氢排除和蛋白酶敏感性试验,及温度、pH、表面活性剂和金属离子对抑菌物质的影响研究。从样品中共获得27株乳酸菌,产细菌素的乳酸菌4株,其中菌株FJY-1抑菌能力最强。经形态学、生理生化与16S rDNA基因序列分析,鉴定该菌株为屎肠球菌。其无细胞上清液在pH 2~9范围内处理2h后能维持60%以上的抑菌活性,对热稳定(121℃,30min),经胃蛋白酶处理后抑菌活性消失;该细菌素对沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等均有较强的抑制作用,并证明其对指示菌的作用方式是杀菌,该细菌素在食品防腐中具有较强的应用潜力。  相似文献