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查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)是植物类黄酮化合物合成的第一关键酶。为了获得金龙胆草(Conyza blinii Lévl.)CHS基因,本研究采用快速扩增cDNA末端(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆得到了金龙胆草CHS基因的DNA和cDNA全长序列,并进行生物信息学分析,通过RTPCR检测该基因在花期不同组织部位中的表达情况并检测对应部位的相对花青素含量。结果表明,获得的CHS基因DNA全长2 098 bp,包括2个内含子;cDNA全长为1 692 bp,含有完整开放阅读框(1 197 bp),编码399个氨基酸,包含查尔酮合酶的标志性序列,命名为CbCHS(GenBank登录号:KJ155749)。序列比对结果显示,金龙胆草CbCHS基因与已报道的其它植物的CHS氨基酸序列具有很高相似性(最高为95%)。半定量RT-PCR结果显示,在叶和茎的表达量最高,相对表达量分别达到87.03%和98.33%,表达量之间没有显著差异(P0.05);在根中CbCHS基因表达量最少,相对表达量仅为9.43%,表达量与其余部位具有显著差异(P0.05)。花青素含量也以茎和叶中最高,根中微量,表明CbCHS基因与花青素的蓄积有一定相关性。本研究首次克隆了金龙胆草CbCHS基因的全长DNA及cDNA序列,研究了其在花期不同组织器官中的表达量差异及与花青素的含量关系,为进一步研究CbCHS基因对金龙胆草黄酮含量的影响及其调控机制提供了基础资料。 相似文献
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为建立快速高效的金龙胆草Conyza blinii H.Lév.组培快繁体系,考察不同生长时期组培样叶片中苦蒿素含量,合理利用并保护金龙胆草药材种质资源,本研究筛选野生金龙胆草幼嫩叶片为外植体,以MS和1/2 MS为基本培养基,探究组织培养各个阶段的最适培养条件。在此基础上,采用HPLC法测定不同生长时期组培样同一叶位叶片中苦蒿素的含量。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基配方为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L,诱导不定芽的最佳培养基配方为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导不定根的最佳培养基配方为1/2 MS+GA30.1 mg/L+IBA 0.1 mg/L。炼苗后移栽的最佳基质是腐殖质和珍珠岩2:1混合。以高效液相色谱仪对不同生长时期金龙胆草组培样叶片鲜样苦蒿素含量进行分析,结果表明移栽3个月5个月7个月1个月炼苗14 d未炼苗。本试验建立了稳定高效的金龙胆草组培快繁体系,并成功获得再生植株,为丰富金龙胆草种资质源提供了理论依据。 相似文献
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