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猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）BJ—4株全基因组序列测定与分析 总被引：24，自引：1，他引：24
在国内首次完成了猪繁殖与呼吸综合征病毒分离毒株的全基因组序列测定。用RT－PCR方法分段扩增出PRRSV北京地区分离株BJ－4株的21条cDNA片段，分别克隆于pGEM-T-easy质粒载体并进行测序，按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSV BJ－4株全基因组cDNA序列。测序结果表明PRRSV BJ－4株基因组全长15504b，包含8个开放阅读框，5′端有190nt先导序列；3′端有256ntUTR，其中包括95ntPoly(A)尾。PRRSV BJ－4株与美洲型毒株VR－2332和Nebreska的核苷酸同源率分别为99．5％和98．4％，而与欧洲型代表株LV株的核苷酸同源率为62．5％，与另一国内分离株CH－1a株编码构蛋白基因的核苷酸同源率为93．3％。 相似文献
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PRRS病毒M蛋白在大肠埃希氏菌中的高效表达 总被引：1，自引：0，他引：1
将猪繁殖呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF6基因从pGEM-T-ORF6重组质粒中亚克隆到pET-5a原核表达载体上，成功构建重组表达质粒pET5-ORF6。将共转化大肠埃希氏菌BL21（DE3）感受态细胞，重组菌经IPTG诱导表达，其细胞裂解物经SDS－PAGE可检测到分子质量约为19ku的目的蛋白带，经薄层扫描分析，目的蛋白占菌体总蛋白的26．8％，采用重组菌裂解物作为包被抗原进行ELISA检测，结果表明表达的蛋白显示特异性。 相似文献
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用聚合酶链式反应检测猪源大肠杆菌卡那霉素耐药基因 总被引：6，自引：0，他引：6
根据编码卡那霉素抗性的磷酸转移酶「ＡＰＨ（３′）－ＩＩ」钝化酶基因的核苷酸序列,设计合成一对引物ＰＩ和Ｐ２,用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术对２６株猪源大肠杆菌临床分离株的卡那霉炮酸转移酶「ＡＰＨ（３′）－ＩＩ」钝化酶基因进行了检测。结果表明,该引物对１４株分离菌株均能扩增出预期的５７８ｂｐ大小的ＰＣＲ产物,与药敏试验的阳性符合率为９３．２％。进一步用限制性内切酶进行酶切分析,发现所有ＰＣＲ产物均出 相似文献
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利用 PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) BJ- 4株的 E基因进行修饰和改造 ,在 E基因上游加入 Kozak序列 ,扩增并克隆 E基因。将 E基因 c DNA亚克隆至真核表达载体 pc DNA3.1( )中 ,构建了真核重组表达质粒 pc DNA- E。用pc DNA- E免疫小鼠 ,经免疫荧光抗体试验检测结果表明 ,重组质粒 pc DNA- E经 3次免疫后 ,所有小鼠血清抗体均为阳性 ,说明pc DNA- E在小鼠体内可诱导特异性的体液免疫应答反应。 相似文献
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用表达非融合蛋白的原核表达载体ｐＢＶ２２０,通过ＰＣＲ技术的引物设计对ＰＲＲＳ病毒ＢＪ－４株核衣壳蛋白（Ｎ）基因起始密码子上游进行了改造和修饰,在其上游加入了 ＥｃｏＲＩ酶切位点。将 ＰＲＲＳ病毒 Ｎ基因插入载体 ｐＢＶ２２０ ＰＬＰＲ启动子和Ｓ－Ｄ序列下游合适距离的位置,成功地构建了含有ＰＲＲＳ病毒Ｎ基因的原核重组表达载体ｐＢＶ－Ｎ。ｐＢＶ－Ｎ转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,经温度诱导后菌体裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现,在约１５ｋＤ处出现一条特异性的目的蛋白条带,分子量大小与ＰＲＲＳ病毒Ｎ蛋白相符,而诱… 相似文献
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PRRS病毒BJ-4株全基因组序列测定与分析 总被引：2，自引：0，他引：2
采用分段设计引物,分段扩增、克隆、序列测定与拼接的方法,对猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）病毒ＢＪ－４株进行了全基因组序列测定和分析。设计合成２２对引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到 ２２条片段,分别与 ｐＧＥＭ－Ｔ－ｅａｓｙ载体连接,转化大肠杆菌ＪＭ１０９。筛选阳性重组子进行测序,然后将测得的序列顺次拼接得到ＰＲＲＳ病毒ＢＪ－４株全基因组序列。序列测定结果表明ＰＲＲＳ病毒ＢＪ－４株基因组全序列共长１５５０４个核苷酸,含有８个开放阅读框,５’端１９０ｂｐ先导序列,３’端有 ２５６ｂｐ ＵＴＲ,其中包括… 相似文献
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近日,本刊记者走访了中国农业大学动物医学院青年教授、传染病与预防兽医学专家杨汉春先生,这位年仅35岁的青年教授正以年青人的热情,现代化的知识和科研手段,启锚扬帆,踏上世界兽医科技发展的轨道。他站在学科的前沿,以学科带头人的身份,为兽医传染病事业的发展和创新起到了巨大的推动作用,他不断地深入实践,把家畜传染病学、兽医免疫学、兽医微生物学的理论知识和生产实践相结合,做到服务生产、服务社会、促进我国畜禽养殖业的健康稳定发展。 相似文献
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鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的多重耐药性 总被引：20，自引：0，他引：20
利用药敏试验监测系统分析了71株鸡源大肠杆菌临床分离菌株对9种氟喹诺酮类药物的耐药性,结果表明临床分离菌株对沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、二氯沙星、单诺沙星、奥比沙星和萘定酸呈现很高的耐药性。耐药率分别为69%、69%、55％、76%、69%、76%和99%;对盖特沙星和左氟沙星有轻度的耐药性,耐药率分别为11％和13％。在71株分离菌株中,只有1株没有耐药性,对3种以上药物有耐药性的菌株占74％(52／70),对6种以上药物有耐药性的菌株占70%(49／70),呈现出多重耐药性。对耐药菌株GyrA基因QRDR氨基酸变异分析表明70株耐药菌株的第83位氨基酸均发生了变异,由丝氨酸(Serine)变为亮氨酸(Leucine)。对6种以上氟喹诺酮类药物有耐药性的49株分离株除了83位氨基酸发生变异外,其87位氨基酸也发生了变异,41株87位的氨基酸由天冬氨酸(D)变为天冬酰胺(N),6株87位的氨基酸由天冬氨酸(D)变为酪氨酸(Y),由天冬氨酸(D)变为甘氨酸和丙氨酸的各1株;对3种以下氟喹诺酮类药物有耐药性的21株87位的氨基酸没有发生变异。由此表明鸡源大肠杆菌GyrA基因QRDR区的变异与菌株对氟喹诺酮类药物的耐药程度密切相关,83位的氨基酸变异是大肠杆菌呈现对氟喹诺酮类药物耐药性的关键氨基酸。 相似文献
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PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达 总被引：6，自引：0，他引：6
用表达非融合蛋白的原核表达载体pBV220，通过PCR技术的引物设计对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒BJ-4株核衣壳蛋白（N）基因起始密码子上游进行了改造和修饰，成功地构建了含有PRRS病毒N基因的原核重组表达载体pBV-N。pBV-N转化大肠杆菌DH5α，温度诱导后菌体裂解物经SDS-PAGE分析发现，在约15000处出现1条诱导前后的pBV220载体对照和诱导前的pBV-N中均缺少的特异性的蛋白条带，分子量大小与PRRS病毒N蛋白相符，并随着诱导时间的延长而变化，在诱导后4h达到高峰。薄层扫描结果显示，重组N蛋白表达量最多可占菌体总蛋白的27.4%。Western-blotting检测，此15000的蛋白带可为PRRS病毒N蛋白的单克隆抗体所识别，表明该重组N蛋白具有良好的抗原性。 相似文献
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将猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒BJ－4株在HS．2H细胞上增殖，经超速离心浓缩病毒。用TRIXOL LS试剂提取病毒基因组RNA后，用RT－PCR方法特异性扩增PRRS病毒BJ－4的ORF6基因片段；经Sma Ⅰ酶切鉴定正确后，将PCR产物克隆到pGEM-Teasy载体上，经Amp/IPTG/X-Gal平板筛选、酶切鉴定和质粒PCR鉴定，初步获得含ORF6基因的阳性重组质粒pGEM-T-ORF6。对重组质粒进行序列测定，并同美洲代表株VR2332和欧洲代表株LV进行比较，结果表明，BJ－4 ORF6与VR2332的ORF6差异较小，核苷酸和氨基酸同源性均为99．43％；而与LV株的差异性较大，核苷酸同源性为70．6％，氨基酸同源性77．4％。 相似文献
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