一种改良的水稻细胞质基因组制备方法     

万雯婷  董扬  于洋  李丽娟  张静  李琼  王荔  胡凤益 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,26(4):437-444

 水稻叶绿体和线粒体基因组较小,且均被测序清楚,可以作为研究细胞质遗传的良好材料,而如何快速有效地分离纯化获得高产量和高质量的细胞质基因组是从DNA水平上研究细胞质遗传变异的前提条件。本研究结合了蔗糖密度梯度离心法-全基因组DNA扩增法(whole genome amplification,WGA),对细胞质基因组的制备进行了改良。改良后的方法仅使用20g的水稻叶片,即可在2d时间内得到浓度达300ng/μL以上,总量达40μg以上的高纯度(OD260/280值为18~20)、完整的叶绿体DNA (chloroplast DNA,cpDNA)和线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA)。该法制备的细胞质基因组可以满足多种细胞质基因组实验的要求,包括Solexa全基因组测序技术的要求。  相似文献   

广适应性籼稻愈伤组织诱导培养基的筛选   总被引：3，自引：1，他引：2  

于洋  张业胜  董扬  万雯婷  李丽娟  张静  李琼  胡凤益 《西南农业学报》2011,24(3)

相比粳稻而言,籼稻愈伤组织诱导一直没有一种通用的诱导培养基。为了找到适用于籼稻愈伤诱导的通用培养基,以明恢63、IR64、RD23三个籼稻品种的成熟胚为材料,在固定成分(300 mg/L水解酪氨酸蛋白+500 mg/L脯氨酸+250 mg/L谷氨酰胺+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂)和相同的培养条件下,以基本培养基(MB、NB、N6和CC 4种基本培养基)、2,4-D(2.0,3.0,4.0、5.0 mg/L 4种浓度)、6-BA(0,0.2,0.4,0.5 mg/L 4种浓度)为影响因素,利用正交实验设计出16种培养基组合,通过评价愈伤质量和愈伤诱导率来筛选最适合的籼稻愈伤组织诱导培养基。结果表明,2,4-D能提高愈伤诱导率,不用6-BA时愈伤质量最好,基本培养基MB的愈伤诱导效果最好。筛选出的籼稻愈伤诱导通用培养基是MB+2,4-D 5.0 mg/L,在28℃黑暗条件下培养20 d。用筛选出来的通用培养基对不同来源的籼稻品种进行愈伤组织诱导,结果表明该通用培养基对多数籼稻品种具有稳定的愈伤诱导效果。  相似文献